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白喉棒状杆菌毒素ELISA检测试剂盒通常采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），具体操作步骤如下：
一、检测原理
通过预先包被白喉棒状杆菌抗原的微孔板，依次加入待测样本、辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，经温育后彻底洗涤，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，最终在酸作用下变为黄色，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值比较，判定样本中白喉棒状杆菌毒素抗体的存在。
二、操作步骤
样本准备
血清/血浆：收集后3000转离心10分钟分离血清或血浆，避免溶血和高脂样本。
保存条件：若不立即检测，样本需分装后冻存于-20℃，避免反复冻融，室温解冻并充分混匀。
试剂准备
试剂盒平衡：试剂盒于2-8℃保存，使用前室温平衡20分钟。
洗涤液稀释：浓缩洗涤液用蒸馏水按1:20或1:50稀释（根据试剂盒说明）。
加样与温育
设置对照孔：阴、阳性对照孔各加入50μL对照液。
样本孔：加入50μL稀释后的样本。
加入检测抗体：每孔加入100μLHRP标记的检测抗体，封板膜封住反应孔，37℃水浴或恒温箱温育60分钟。
洗涤
弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去，重复5次（或用洗板机洗涤）。
显色与终止
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
每孔加入50μL终止液，15分钟内于450nm波长测定OD值。
三、结果判断
试验有效性
阳性对照孔OD值平均值≥1.00，阴性对照孔OD值平均值≤0.15。
临界值计算
临界值（Cutoff）=阴性对照孔平均值+0.15。
结果判定
阴性：样本OD值<临界值。
阳性：样本OD值>临界值。
四、注意事项
操作规范
实验中不用的板条应立即放回自封袋密封保存。
所有液体组分使用前需充分摇匀，避免产生气泡。
安全防护
避免直接接触终止液和底物A、B，若接触需立即用水冲洗。
实验中禁止吃喝、抽烟或使用化妆品。
仪器与设备
需配备450nm酶标仪、高精度加样器及枪头、37℃恒温箱。
试剂保存
试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。
试剂盒需2-8℃避光防潮保存，严格按照说明书操作。
五、试剂盒优势
高敏感性与特异性：欧盟CE认证，不与其他可溶性结构类似物交叉反应。
操作简便：即用型试剂，适用于手动或自动化检测系统。
临界值质控：提供质控品，确保检测结果准确可靠。
六、应用领域
疾控中心、科研实验室、医院等机构用于白喉棒状杆菌毒素抗体的检测，辅助白喉疾病的诊断与流行病学调查。
通过上述方法，可高效、准确地检测样本中白喉棒状杆菌毒素抗体的存在，为白喉的防控提供科学依据
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