线虫CED-9蛋白（CED-9）ELISA检测试剂盒

线虫CED-9蛋白（CED-9）ELISA检测试剂盒是一种用于定量检测线虫（如秀丽隐杆线虫）或其相关样本中CED-9蛋白浓度的免疫学工具。以下是关于该试剂盒的详细信息及关键要点：

1. 试剂盒原理

基于酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，利用特异性抗体与CED-9蛋白结合，通过酶标记的二抗催化显色反应，根据吸光度值定量分析CED-9的浓度。

2. 主要组成成分

• 预包被板：包被有针对CED-9的单克隆/多克隆抗体。

• 标准品：已知浓度的CED-9重组蛋白（如His标签融合蛋白），用于制作标准曲线。

• 检测抗体：酶标记（如辣根过氧化物酶HRP）的抗CED-9抗体。

• 底物A/B：显色底物（如TMB）。

• 洗涤缓冲液、封闭液、终止液等辅助试剂。

• 说明书：实验步骤、注意事项及参考数据。

3. 适用样本类型

• 线虫组织匀浆液（如体壁、肠道、生殖腺等）。

• 线虫裂解液（需超声破碎或化学裂解）。

• 血淋巴或培养液中的分泌型CED-9（需验证是否分泌）。

4. 关键参数

• 检测范围：通常为0.1–100 ng/mL（具体依试剂盒而定）。

• 灵敏度：可达pg/mL级别（高敏型试剂盒）。

• 特异性：需确认与其他Bcl-2家族成员（如CED-3、CED-4）的交叉反应性。

• 重复性：板内CV＜8%，板间CV＜10%。

5. 实验步骤概要

1. 样本准备：匀浆线虫样本，离心取上清，测定蛋白浓度（可选）。

2. 加样：将样本或标准品加入预包被板孔中，孵育（1–2小时）。

3. 洗涤：去除未结合物质。

4. 加检测抗体：孵育（30分钟–1小时）。

5. 显色：加入底物，避光孵育（10–15分钟）。

6. 终止反应：加入终止液，测OD450/630 nm值。

7. 数据分析：通过标准曲线计算样本浓度。

6. 注意事项

• 样本处理：避免反复冻融，防止蛋白降解（建议加入蛋白酶抑制剂）。

• 稀释建议：超量程样本需按说明书稀释（如使用样本稀释液）。

• 对照设置：必须包含空白孔、阴性对照（如无关抗体）和阳性对照（如重组CED-9）。

• 保存条件：未用试剂4°C保存，长期储存需-20°C（避免反复冻融）。

7. 常见问题与解决方案

• 信号弱或无信号：

• 检查样本是否含有CED-9（Western blot验证）。

• 延长孵育时间或优化抗体浓度。

• 高背景值：

• 增加洗涤次数或延长洗涤时间。

• 优化封闭剂（如使用BSA或脱脂奶粉）。

• 标准曲线不理想：

• 确保标准品复溶正确，无降解。

• 检查底物是否过期或配制错误。

8. 应用领域

• 基础研究：研究线虫发育、凋亡调控机制（如与CED-3/CED-4的协同作用）。

• 药物筛选：评估抗凋亡/促凋亡化合物对CED-9表达的影响。

• 疾病模型：分析线虫作为模式生物在人类神经退行性疾病中的模拟表型。