测序试剂盒的捕获具体步骤

来源：重庆市华雅干细胞技术有限公司 2025年04月02日 15:54

测序试剂盒的捕获步骤通常指的是在基因组测序过程中，如何从样本中选择和富集特定的目标区域。捕获步骤通常与目标区域捕获（TargetedCapture）技术相结合，主要用于高通量测序（NGS）中，通过选择性地捕获特定DNA片段以提高分析的灵敏度和准确性。下面是捕获步骤的概述：

1.样本准备

首先，需要从样本中提取DNA。样本可以是血液、组织、唾液等，提取过程会根据不同的样本类型选择不同的提取方法。提取后的DNA会被质控，以确保其质量和完整性满足后续实验的要求。

2.DNA片段化

为了便于后续的捕获和测序，提取到的DNA需要经过片段化。这一步骤通过物理（例如超声波破碎）或酶切（如限制性内切酶）的方法将DNA分解成适合捕获的小片段。

3.目标区域设计与探针合成

根据研究的需要，选择目标区域（例如特定基因、外显子或其他感兴趣的序列）。然后，合成与这些目标序列互补的探针。探针通常是固定在微珠或其他固相支持物上的寡核苷酸序列。这些探针可以与样本中的目标DNA序列特异性结合。

4.目标区域富集（捕获）

在这一步，添加合成的探针与片段化的DNA进行杂交。探针与目标区域序列结合后，未结合的非目标DNA序列会被洗脱掉。这个过程可以通过反应体系中的条件控制，使目标DNA区域与探针特异性结合。

5.洗脱

捕获了目标序列后，使用洗涤步骤去除非特异性结合的杂散DNA。通过一定的盐浓度和温度控制，确保只有目标DNA区域被保留下来，而其他无关序列被去除。

6.扩增（可选）

有时，为了提高捕获序列的量，捕获后的DNA片段会进行PCR扩增。这一步是为了增加目标区域的信号强度，以确保后续测序的灵敏度。

7.文库构建

捕获后的目标区域DNA可以直接用于文库构建。文库构建过程中，DNA片段的两端会连接适配器，以便后续的测序平台进行识别和扩增。

8.测序

文库构建完成后，将其加载到高通量测序平台（如Illumina、BGISEQ等）进行测序，获取高质量的序列数据。

总结

捕获步骤的关键在于目标区域的选择、探针设计以及洗脱过程，通过精确的操作，可以确保只富集出感兴趣的区域，从而提高测序的效率和准确性。

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