赛默飞Lipofectamine 2000转染试剂应用全攻略：从入门到精通

赛默飞Lipofectamine 2000转染试剂（货号11668019）应用全攻略：从入门到精通

一、产品核心优势与应用场景

Lipofectamine 2000是赛默飞世尔推出的明星级阳离子脂质体转染试剂，广泛用于DNA/RNA的哺乳动物细胞递送。其核心优势体现在：

· 高转染效率：适用于贴壁细胞（HEK293、HeLa）和悬浮细胞（CHO、Jurkat），DNA转染效率可达85%-95%（数据来源：Thermo Fisher Protocol）

· 低细胞毒性：通过优化脂质体结构，48小时培养后细胞存活率≥90%

· 多场景适配：支持质粒DNA、siRNA、miRNA及CRISPR/Cas9系统共转染

二、标准化操作流程（以24孔板为例）

1. 试剂准备

· 稀释DNA：需保持无菌环境，推荐使用Opti-MEM培养基（货号31985070）将DNA稀释至0.5-2 μg/μL

· 脂质体混合：Lipofectamine 2000与稀释液比例为1:25（如：1 μL试剂+24 μL培养基）

2. 复合物形成

· 将脂质体稀释液与DNA稀释液按1:1体积混合

· 关键步骤：室温静置20分钟，形成稳定脂质体-DNA复合物（时间偏差＞5分钟会导致效率下降10%-15%）

3. 细胞处理

· 贴壁细胞需达到70%-80%融合度

· 每孔加入100 μL复合物，37℃孵育6小时后换液

三、针对不同细胞类型的优化策略

四、三大常见问题解决方案

1. 转染效率低

· 排查方向：DNA纯度（OD260/280需在1.8-2.0）、细胞状态（传代次数≤15）

· 优化方案：添加增强剂（如PlasmidPlus，货号A31852）

2. 细胞毒性显著

· 原因分析：脂质体过量或孵育时间过长

· 改进措施：将转染时间缩短至4小时，DNA浓度降低30%

3. RNA干扰效率不佳

· 技术要点：siRNA终浓度控制在20-50 nM，推荐使用Silencer Select系列（货号4392420）

· 验证方法：设置Cy3标记siRNA对照组，荧光显微镜观察摄取效率

五、高阶应用：CRISPR递送实例

Protocol亮点：

· Cas9质粒与sgRNA质量比采用1:3（如 1 μg : 3 μg）

· 共转染荧光报告系统（如pEGFP-N1，货号6085-1）

· 使用流式细胞术筛选后，基因编辑效率提升40%（参考文献：Nat Methods 2016）

六、保存与质量控制

存储条件：4℃避光保存，避免反复冻融（冻融超3次活性下降50%）

有效期验证：开封后6个月内使用，每月进行转染阳性对照实验

质控标准：每批次均通过HEK293细胞转染测试，EGFP表达率≥85%

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