超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒

（A002-192T 酶标板法）

一、 测定原理

该方法利用NADH-PMS-NBT为超氧阴离子(O₂^·-)生成系统，超氧阴离子清除剂能减少NBT的蓝色。通过检测560nm处吸光值可判断体系中还原物质的还原能力。

二、 试剂组成

试剂一：液体50mL×1瓶；

试剂二：液体100μL一瓶；

试剂三：粉剂一支；

试剂四：粉剂一支；

试剂五：1mg/mL芦丁标准品，100μL。

三、 储存条件及有效期

试剂盒-20℃可保存6个月。

四、 试剂的配制

试剂二工作液：加入10mL试剂一，充分摇匀，现配现用，注意避光；

试剂三工作液：加入10mL试剂一，充分摇匀，现配现用，配好后冰上保存，2h内使用；

试剂四工作液：用50mL双蒸水溶解，摇匀后，取1mL，加入9mL试剂一，现配现用，注意避光，配好的试剂请于2小时内用完。

试剂五：阳性对照，按需使用，-20℃保存。

五、 操作步骤

充分混匀

充分混匀，室温避光静置5min使之充分反应。560nm处采用酶标仪测定吸光值。

¹空白管很重要，建议做3个以上平行；

²如样品颜色较浅可不做对照管

六、计算公式

注：1 如未做对照孔，可以将其视作为0；

2 阳性对照求值时将其视作测定孔进行计算即可。

七、注意事项

1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；

2. 如不确定样品的超氧阴离子自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。

3. 试剂二、三切记全程低温操作，尤其试剂三，长时间室温放置或反复冻融会使其失效。试剂四切记避光保存，特别是配制后，需用铝箔纸包裹，且应尽快用完。建议在做好一切其它准备工作后再配制试剂四应用液。试剂四正常颜色为黄色，强光照射下，5-10分钟内会变为绿色，随后变为蓝色，变色后试剂不可再用！

4. 试剂二、三应用液和样品混匀后再加入试剂四，次序颠倒会导致不显色。

5. 部分物质会导致显色加深，导致求得的抑制率是负值，如遇到此类现象请先确定该物质是否具有超氧阴离子清除能力，再考虑更换方法，如邻苯三酚自氧化法等进行测试。