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本文建立了食品中乳铁蛋白的HPLC测定方法。参考GB 5009.299-2024中的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack Scepter C4-300分析乳铁蛋白，结果显示，乳铁蛋白峰型对称，重现性良好，满足检测要求。此方法可为食品中乳铁蛋白的测定提供参考。
岛津消耗品方案
针对乳铁蛋白的检测，SGLC可提供全套解决方案，包含以下产品：
Shim-pack Scepter C4-300, (5 μm, 4.6×250mm, PN: 227-31183-06)
SHIMSEN 肝素亲和柱, ≥3mg(PN: 380-00930-02)
SHIMSEN Vial 低吸附PP样品瓶及盖垫，1.5mL(PN: 380-00511 & 380-00503)
SHIMSEN Disc PES聚醚砜材质针式滤器, 25 mm, 0.45 µm 100/box (PN:380-00304)
Shimadzu LC-40B X3高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06）
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）
SHIMSEN Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
低吸附PP样品瓶SHIMSEN Vial（P/N：380-00509）；
Nichipet Air移液枪：Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；
Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；
Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；
Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。
取牛乳铁蛋白标准品50 mg，用水溶解配置标准储备液（5.0 mg/mL）。取标准储备液1 mL，用磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至10 mL，制成标准中间液体（0.5 mg/mL），临用现配。
准确移取上述牛乳铁蛋白标准中间溶液，用磷酸盐缓冲液Ⅰ稀释定容，配制成浓度分别为1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 和200.0 μg/mL的标准系列工作液，临用现配。
注：乳铁蛋白易被玻璃样品瓶吸附，建议使用低吸附PP样品瓶；低浓度点（1.0 μg/mL、5.0 μg/mL）需现配现进样。
微孔滤膜可能会导致目标化合物吸附，样品不建议过膜。
色谱柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06）
流 速：1.0 mL/min
进样量：50 μL
柱 温：30 ℃
检测器：280 nm
流动相：A：0.1%三氟乙酸溶液
B：乙腈
梯度程序如下：
按照上述色谱条件（1.3）进行采集，色谱图如下：
注：首次使用Shim-pack Scepter C4-300 色谱柱时，可能出现响应低（低浓度点甚至不出峰）、峰形不对称的情况，需对色谱柱进行钝化处理（即使用0.5 mg/mL 的标品进样100 μL），钝化后连续进空白溶剂直至无乳铁蛋白目标峰后，再进行分析。
本文建立了食品中乳铁蛋白的HPLC 测定方法。参考GB 5009.299-2024 中的色谱条件，采用色谱柱Shim-pack Scepter C4-300 分析乳铁蛋白，结果显示，乳铁蛋白峰型对称，重现性良好，满足检测要求。此方法可为食品中乳铁蛋白的测定提供参考。
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