厌氧培养箱菌种置入操作流程及培养方法

厌氧培养箱菌种置入操作流程及培养方法

‌一、菌种置入操作流程‌

‌准备工作‌

检查取样室内门是否关紧，确保操作室与外界隔绝‌。

清洁取样室及操作手套，避免污染；确认钯催化剂和干燥剂活性（若失效需更换或再生）‌。

‌菌种传递‌

打开取样室外门，将菌种放入取样室后立即关闭外门‌。

‌气体置换流程‌：

‌抽真空‌：启动真空泵，抽真空至压力≥66kPa（500mmHg），停止后关闭真空阀‌。

‌充氮气‌：打开氮气阀向取样室充入氮气至压力恢复常压，重复抽真空-充氮气操作3次，置换残留氧气‌。

‌混合气体补充‌：最后一次充气时改用混合气体（N₂ 85%、H₂ 10%、CO₂ 5%），流量控制在10ml/min‌。

‌环境验证‌

使用美兰指示剂检测氧浓度：若指示剂保持无色，表明操作室内氧浓度≤1ppm，达到厌氧标准‌。

‌二、培养方法及环境维持‌

‌参数设置‌

设置恒温培养温度（常规35–37℃），控温精度需达±0.3℃‌。

启动钯催化剂和除氧装置，持续吸附微量氧气并维持湿度<10%‌。

‌培养操作‌

通过手套操作孔进行菌种接种，避免手套破损导致氧气渗入‌。

将接种后的培养基平皿或试管置于操作室内的恒温区域，确保风道畅通以保持温度均匀‌。

‌长期培养维护‌

‌气体补充‌：每日向操作室持续通入微量混合气体（10ml/min），通过钯催化反应消耗残留氧气‌。

‌环境监测‌：每日检查美兰指示剂颜色变化，若变蓝需重新置换气体‌。

‌耗材更换‌：每周再生钯催化剂（160℃烘烤2小时），每1–2年更换一次；干燥剂和活性炭每1–2周更换‌。

‌三、关键注意事项‌

‌安全操作‌

混合气体含氢气，操作时远离火源并确保设备接地良好‌。

传递菌种时严格遵循“抽真空-充氮气”流程，避免氧气残留‌。

‌设备维护‌

定期校准温度传感器和氧浓度检测仪，防止数据偏差‌13。

停止使用时，运行40℃以上烘干程序2小时并开门通风，防止箱内冷凝水积聚‌。

‌异常处理‌

若氧浓度异常升高，立即暂停实验，排查气路泄漏或催化剂失效问题