Cistro磁力架的应用之IP免疫沉淀篇

  免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP)有广义和狭义之分，广义的免疫沉淀包括特定目标蛋白质免疫沉淀（IP）、蛋白质复合物免疫沉淀（Co-IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）和RNA免疫沉淀（RIP），狭义的免疫沉淀是指特定目标蛋白质的免疫沉淀，也就是常说的IP实验，IP实验可从含有多种不同蛋白质的样品中分离浓缩特定的蛋白质。

免疫沉淀原理

免疫沉淀是一种利用特异性抗体结合抗原，并通过沉淀富集的方式从复杂的样本中分离出目标蛋白的方法。主要用于从复杂的生物样本中分离和纯化单一特定蛋白质，依赖于抗体对目标蛋白的特异性识别并形成抗原-抗体复合物，然后通过物理方法（如琼脂糖珠或磁珠 ）将这些复合物沉淀下来，再结合Western blot（WB）或质谱（mass spectrum，MS）对目标蛋白进行检测分析，即可对目标蛋白进行定性/定量分析。

磁珠的优势

l 结合能力和得率

目前磁性微粒已经大幅取代琼脂糖，成为免疫沉淀和其他微量亲和纯化方法的支持物。磁性微粒是球形固体，抗体结合于每个磁珠的表面。虽然磁珠不具有多孔中心以增加结合能力的优势，但它们明显小于琼脂糖微珠（直径0.2-4 μm），可提供足够大的总表面积以满足高容量的抗体结合，并且抗体很少会在温和的洗涤步骤（磁体）中丢失。因此，尽管磁珠的抗体结合能力低于琼脂糖，但最终的抗原得率通常与琼脂糖相等或比琼脂糖更高。

l 可重复性和纯度

使用琼脂糖时，难以在不破坏和靠近一些沉淀树脂的前提下移除缓冲液。使用磁珠时，强力磁力架可将磁珠固定在管壁，所以无需碰触磁珠沉淀即可移除缓冲液。此外，琼脂糖通常需要较长的孵育时间（使溶液向内部空间的扩散）和预纯化步骤（控制非目标蛋白的非特异性结合）。由于所有的相互作用均发生在磁珠的外表面，并且磁珠的尺寸更均一，所以磁珠的可重复性和纯度通常高于琼脂糖。

l 简单、快速和自动化

琼脂糖和磁珠之间的上述差异正是目前免疫沉淀优先选择磁珠的原因。由于琼脂糖免疫沉淀需要较长的孵育时间、预纯化步骤和多次离心，所以其需要大量手动操作，总时间为1-1.5小时。相反，一次磁珠免疫沉淀使用只需大约30分钟即可完成。此外，由于磁性分离不需要离心，在处理多个样品时更简单、更快速，更适合自动化。

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