端粒酶活性检测

端粒酶简介

端粒酶是一种RNA依赖性DNA聚合酶和逆转录酶，由RNA和蛋白质组成，可维持端粒长度（Greider and Blackburn 1989）。端粒酶以自身RNA为模板，合成端粒DNA，从而使细胞获得无限增殖。其主要由3部分组成，即人端粒酶RNA（humane telomerase RNA component, hTERC）、端粒酶协同蛋白（humane telomerase associated protein, hTEP1）及端粒酶逆转录酶（humane telomerase reverse transcriptase, hTERT），其中hTERT被认为是端粒酶活性表达的关键组分，hTERT编码的 mRNA 水平与端粒酶整体活性一致。因此，可以用hTERT亚基的mRNA水平基因表达量来衡量端粒酶活性。

端粒酶活性检测的主要方案

1. 直接检测法（Trap法）基于端粒酶对端粒酶底物DNA的催化延伸作用，可对端粒酶进行特异性识别，进而实现端粒酶活性的检测。检测端粒酶活性的方法主要有端粒重复序列扩增法（TRAP）、端粒重复序列延伸法、比色法、荧光法、表面增强拉曼光谱法等。

2.间接检测法（荧光定量法）主要是通过检测端粒酶催化亚基hTERT基因的表达量间接反映端粒酶的活性。hTERT基因表达量与端粒酶活性极显著相关，也同时都是重要的肿瘤标志物。催化亚基hTERT基因表达量检测。

Biowing端粒酶检测

本 产 品试剂盒采用双色荧光qPCR   (TaqMan探针法) 检测端粒酶催化亚基TERT基 因和 内参基 因 GAPDH 。通过提取细胞RNA ，利用特异性逆转录引物进行逆转录反应， 以cDNA为模板在单管中利用 多重荧光定量PCR进行扩增反应 (双重探针： FAM 、Cy5) 。选用293T细胞为阳性对照以及MRC- 5细 胞为阴性对照，判断样本中是否有TERT基因表达 。该试剂盒具有以下特点：

1 . 灵敏：双色探针，灵敏度高。                 

2 . 稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

3 . 可靠：含内参基因，避免假阴性。

4 . 方便：操作简单，无需电泳步骤。

5.  定量： 以CT值判断，可定量检测。

结果展示

 图 左: 阳性对照的扩增曲线；右: 阴性对照的的扩增曲线

( 蓝色为TERT基因曲线, 红色为内参基因曲线)