Bst DNA聚合酶等温扩增到分子克隆应用

Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase 来源于枯草杆菌(Bacillus stearothermophilus)的DNA聚合酶，能够耐受高温(最高可达65°C)，保持较高的活性。Bst DNA聚合酶具有热稳定性高、不具外切活性、高保真和较高活性等优点，使其非常适合用于高温PCR及需要单链末端产物和高保真序列的实验。Bst DNA聚合酶本身不具有5'→3'外切酶活性和3'→5'外切酶活性，可以产生带单链过伸端的PCR产物。这有利于其用于一些需要带单链末端产物的实验，如CRISPR等。Bst DNA聚合酶在产物克隆和测序、酶促研究以及技术和产品开发等领域有重要应用。Bst DNA聚合酶可以实现LAMP产物的高保真和快速扩增，缩短反应时间，提高效率，且易于操作，这为LAMP技术的发展和应用提供重要支持。

特点：

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有较高的DNA复制保真度，可以准确扩增DNA序列，产生高保真的扩增产物。这使其非常适合用于对扩增产物序列要求较高的实验。

2. 较高活性

 Bst DNA聚合酶具有较高的DNA聚合活性，可以在较短时间内完成DNA的复制和扩增，实现快速PCR扩增。这可缩短PCR反应时间，加快扩增进程。

3. 易操纵

Bst DNA聚合酶易于精制和纯化，价格较低廉，使用也较为方便，这使其成为常用的DNA聚合酶之一。

Bst DNA聚合酶应用较广泛:

1. 高温PCR

Bst DNA聚合酶能耐高温，可以用于高温PCR，扩增GC含量高和复杂二级结构的模板。这在扩增一些病原体DNA和环境DNA时具有重要意义。

2. CRISPR/Cas9基因编辑

CRISPR/Cas9系统需要带单链过伸端的gRNA和线性化质粒，Bst DNA聚合酶不具外切活性，可以用于制备这些产物。

3. 产物克隆

使用Bst DNA聚合酶可以产生带dA突出端的PCR产物，易于使用TA克隆进行克隆，这为一些实验提供方便。

4. 测序

Bst DNA聚合酶可以产生高质量的PCR产物，这为基因测序等实验提供理想的模板。

5. 酶促动力学研究

Bst DNA聚合酶易于纯化和定量，其酶促动力学研究具有重要理论意义。

6. 技术开发

Bst DNA聚合酶用于LAMP、RPA、SMRT测序等技术的开发，拓展科研方法和手段。

7. 生物反应器

Bst DNA聚合酶可以配合生物反应器连续产生PCR产物，这在一些生产过程中具有应用。

8. 检测试剂盒

许多PCR检测试剂盒选择Bst DNA聚合酶作为DNA聚合酶，用于病原体的检测。

Bst DNA聚合酶在LAMP技术的应用:

1. 高保真

Bst DNA聚合酶具有较高的DNA复制保真度，可以准确扩增DNA序列，实现LAMP产物的高保真扩增。这对LAMP产物的序列要求较高的应用具有重要意义。

2. 热稳定

Bst DNA聚合酶能够耐受LAMP反应的高温(通常65°C)，在此温度下保持较高活性，可以实现快速的等温扩增。这使LAMP反应时间大大缩短，加快检测速度。

3. 不具外切活性

Bst DNA聚合酶本身不具有外切酶活性，不会降解LAMP引物和产物的单链过伸端。这有利于LAMP反应的进行和产物的稳定。

4. 较高活性

Bst DNA聚合酶具有较高的DNA聚合活性，可以在LAMP反应温度下快速完成DNA链的合成，实现快速等温扩增。这也可缩短LAMP反应时间，提高扩增效率。

5. 易操作

Bst DNA聚合酶较易纯化和使用，这使其适合用于LAMP技术的商业化和普及。