溶血标本可能会增加非特异性显色

   防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP也会发生假阳性反应。一般说来，5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。逾越一周测定的需-20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并防止发生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，廓清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保管作多次检测，宜少量分装冰存。保管血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。

　　要注意防止出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，以HRP为标记酶的ELISA 测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。

　　样本的采集及血清分离中要注意尽量防止细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白发生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌β-半乳糖苷酶自身会对用相应酶作标记的测定方法发生非特异性干扰。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在28℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保管。样本的长时间保存，应在-70℃以下。

　　冰冻保管的血清标本须注意防止因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可标本在保管中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测