土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）

试剂盒说明书

微量法 100 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

S-LAP 是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-LAP 分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP 活性。

试剂的组成和配制：

自备仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿和蒸馏水。

S-LAP 测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。

2、在试剂二瓶中加入 15ml 试剂一充分溶解（如较难溶解，可 60℃水浴加热约 30min 促进溶解）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、操作表：

混匀， 37℃振荡反应 1h 后，8000g 4℃离心 10min，取 200μl 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中，405nm 处测定吸光值 A，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

S-LAP 活力单位的计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

单位的定义：每天每 g 土样每天生成 1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V 反总÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA

V 反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

单位的定义：每天每 g 土样每天生成 1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V 反总÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA

V 反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。