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01. 贴壁VS悬浮转染区别
贴壁转染与悬浮转染在操作流程、时间成本、转染效率、操作难度、细胞用量、观察难度和适用场景上有所区别。贴壁转染通常需要较长时间等待细胞贴壁，但操作简单，转染效率高，适合常规转染实验和需要高效率转染的场景。悬浮转染则时间成本较短，细胞用量更灵活，适合快速筛选实验和大规模转染。
02. 细胞培养与准备
以LX2细胞为例，这是一种人类肝星状细胞的永生化细胞系，广泛用于肝脏研究。LX2细胞贴壁生长，呈上皮细胞样。培养基成分为DMEM培养基，含10%胎牛血清和1%双抗。转染前，确保细胞处于良好生长状态，活率需超过90%。调整细胞转染密度时，避免反复离心，以免影响细胞活力和转染效率。
03. 转染操作
3.1 细胞准备
- 提前一天种板，准备贴壁细胞。
- 在96孔板中加入约2.5×10^4细胞，细胞过夜贴壁。
- 待细胞汇合度为70%-80%时，弃去培养基后，用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次，并加入20 μL Opti-MEM备用。
3.2 配置ProteanFect转染体系
- 在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA，充分混匀。
- 往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混匀。
3.3 转染
- 将上述ProteanFect转染液加入细胞。
- 37℃培养箱孵育60分钟。
04. 转染检测
使用ProteanFect试剂盒转染LX2细胞后，可以通过荧光显微镜观察EGFP的表达，评估转染效率和细胞形态。细胞活率可通过镜下观察、台盼蓝染色或流式细胞术等方法检测。
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