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现货豚鼠(Guinea Pig)嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP) ELISA试剂盒

来源:上海酶联生物科技有限公司   2012年06月15日 11:50  

 豚鼠(Guinea Pig)嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP) ELISA试剂盒

 

本试剂仅供研究使用  标本:血清或血浆

 豚鼠(Guinea Pig)嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP) ELISA试剂盒

试验原理:

ECP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知ECP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ECP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ECP的浓度呈比例关系。

 豚鼠(Guinea Pig)嗜酸细胞阳离子蛋白 (ECP) ELISA试剂盒

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型

塑料膜板盖1块半块即用型

标准品:80ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀

空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

生物素标记的抗ECP抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释

底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型

 

自备材料

1.蒸馏水。

2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3.振荡器及磁力搅拌器等。

 

安全性

1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

 

操作注意事项

1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

 

样品收集、处理及保存方法

1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

试剂的准备

1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

80 ng/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。

40 ng/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

20 ng/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

10 ng/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

5.0 ng/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液

2.5 ng/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

0 ng/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。

 

2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

 

 

操作步骤

1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

建议使用的实验方案

标准品浓度(ng/ml)

A8080样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

B4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

C2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

D1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

E5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

F2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

 

局限

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。

 

试剂盒性能

1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

 

结 果 判 断 与 分 析

1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的ECP标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的ECP含量可根据其OD值由标准曲线换算出浓度。

 

3、检测值范围:0-80ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

PB0702-25gp-Phenylenediamine dihydrochloride 对苯二胺盐酸盐[624-18-0]25g
P6710-100ml2-Phenylethanol 2-苯乙醇[60-12-8]100ml
P4066-25gDL-alpha-Phenylglycine DL-苯甘氨酸[2835-06-5]25g
P2853-25g(R)-(-)-2-Phenylglycinol D-苯甘氨醇[56613-80-0]25g
PB0704-100mlPhenylhydrazine 苯肼[100-63-0]100ml
PB0705-25gPhenylhydrazine hydrochloride 盐酸苯肼[59-88-1]25g
P2088-25g3-Phenylpropionic acid 3-苯丙酸[501-52-0]25g
PB0706-100g1-Phenyl-3-pyrazolidone 菲尼酮[92-43-3]100g
R0278-25gRhodamine B 罗丹明 B[81-88-9]25g
 

 

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