慢病毒转染贴壁细胞全流程详解

慢病毒转染贴壁细胞全流程详解

一、细胞种板

将细胞种在12孔板中，每孔1.5×10^5个细胞。每孔加入1ml wan全培养基。
二、病毒感染

1. 待细胞生长至30%～50%时开始转染。
2. 将病毒从冰箱取出，放在冰上融化。
3. 打开生物安全柜，关闭风机，戴好帽子和口罩。
4. 弃去培养基，用PBS洗三次。
5. 每孔加入500ul wan全培养基。
6. 根据公式计算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）= MOI x 细胞数 / 病毒滴度（TU/mL）× 1000。

7. 4小时后，再向孔板中加入500ul wan全培养基，补足1ml。

三、换液

 感染后24小时，吸去含病毒的培养液，换上新鲜的 wan全培养液，继续37℃培养。

四、观察与筛选

感染后48小时，通过荧光显微镜初步观察GFP表达效率。一般感染后72小时达到表达高峰。
对于携带Puromycin抗性基因的病毒，换上含适当浓度Puromycin的新鲜 wan全培养液，筛选稳定转导的细胞株。

天津益元利康生物科技有限公司：

（一）辐射五大服务方向：

1. 国内试剂耗材经销代理；

2. 国外试剂订购（直订，或境外代理）；

3. 基因组测序（二代，二代+三代）；

4. 基因分型（SNP检测）：低/中/中 高通量项目；

5. 生物样本运输（国内、）；

（二）多家代理品牌，涉及30多种较有名品牌，经营代理500多个品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、

Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix International Humic、biocytex、Toxin Technology、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、horizon discovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷门品牌，均能给客户购买到。价格优，货期短，可加急，快10天到货；保证服务质量，所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务，

公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大，清华，地大，中科院各所，各大药企等等。

专业订购国内外试剂耗材，常备现货，一手货源，欢迎合作。