土壤硝态氮试剂盒说明书

微量法 100T/96S

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

硝态氮是指硝suan盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。

测定原理：

在浓酸条件下，NO^3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×2 支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加 1ml 浓硫酸充分溶解。

自备仪器和用品：

蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、振荡仪。

样本处理：

按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 新鲜土样，加入 1mL 蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取 1h，25℃，10000g 离心 10min，取上清待测。

测定操作表：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。

2、操作表（于EP 管中加入下列试剂）：

混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，转移 200uL 至微量石英比色皿/96 孔板中测定 410nm 处吸光值A，△A=A 测定管-A 空白管。

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO3—— N 含量（mg/kg 鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V 样总） =64.1×（△A-0.0073）÷W V 样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO3—— N（mg/kg 鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V 样总）=128.2×（△A-0.0073）÷W V 样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

注意事项：

1、硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度一致。

2、土壤经风干或者烘干很容易引起 NO3—— N 的变化，所以最好采用新鲜土壤进行测定，以准确反映该指标含量。

3、试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。

4、试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

5、*低检出限为 100μg/kg。