提取纯化产品册---02 组织保存产品

RNA-easy^TM Isolation Reagent（保存条件：2-8℃储存 , 于 2-8℃运输）

常温RNA提取试剂(R701)

操作简便 单相提取，无需多相分层，并且全程可在室温进行操作

兼容性广 广泛适用于各类动植物和微生物样品，轻松应对各类培养细胞

RNA 质量高 RNA 纯度高，完整度好，产量媲美传统 Trizol 法提取

安全低毒 无需使用CHCL3、β- 巯基乙醇等有毒有害试剂

产品概念

RNA-easy^TM Isolation Reagent广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。与传统Trizol提取方法相比，本产品使用方法简单，不需要使用CHCL3进行分层，且全程可在常温进行；此外，本产品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同时，将蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底，从而实现单相提取，并有力保证了RNA的完整度和纯度。使用本产品在50 min内即可完成全部的提取过程，提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

性能展示

样本兼容性广

分别使用 Vazyme #R701 与市售 Trizol 产品 ( 来自 T、Ta、Ti 公司 )，按照各自说明书对小鼠肝脏 (25 mg)、玉米叶 (20 mg) 和 HEK293细胞 (2 × 10⁶ 个 ) 进行总 RNA 提取，并对最终获得的 RNA 产物(1 μg) 进行琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出，Vazyme #R701 能很好地兼容不同样本总 RNA 的提取。

RNA 产量高

分别使用Vazyme #R701 与市售Trizol产品(分别来自 T、Ta、Ti公司)，按照各自说明书对小鼠肝脏(25 mg)、玉米叶(20 mg)和HEK293细胞 (2×106个)进行总RNA提取。以T公司产量为基准，可以看出，Vazyme #R701 提取不同样本的总RNA与市售其他产品相比，产量更高，且对细胞样本的提取表现最佳。

RNA 质量高

分别使用 Vazyme #R701 与市售 Trizol 产品，按照各自说明书对 HEK293 细胞 (2 × 10⁶ 个 ) 进行总 RNA 提取，并对最终获得的 RNA 产物使用 Onedrop 测定 OD260/280 比值 , 以及 Agilent 2100 Bioanalyzer 进行 RNA 完整度分析。从图中可以看出，Vazyme #R701 提取的 RNA 完整度好，纯度与 T 公司和 Ta 公司处于相同水平，超过 Ti 公司 (P 值 =0.0077)。

操作流程概要

适用范围
动物组织（肝脏、心脏、肌肉、脑组织、肾脏、斑马鱼胚胎等）、植物组织（水稻、玉米、拟南芥、小麦、大豆、土豆、烟草等）、
细胞（HEK293、Hela、杂交瘤、CHOK1、黑色素瘤 B16F10、HepG2、心肌细胞 H9C2、MEF 等）、细菌（大肠杆菌等）、真菌（酵母、曲霉等）

组分

自备材料

异丙醇，75% 乙醇 (RNase-free ddH2O 配制 )，RNase-free ddH2O

样本制备及提取流程

样本制备

动物/植物组织

液氮研磨：

将新鲜组织经液氮冻后，迅速转移至液氮预冷的研钵中，用研杵研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显可见颗粒）。

将研磨成粉的样品转移至离心管中，大约每25mg组织加入500μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent)，剧烈振荡或移液枪吹打，使样品充分裂解。
直接裂解：计算细胞数量，全部弃除培养液，每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy，用枪吹打使细胞从壁上全部脱落，将裂解液转移至离心管中，
用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
胰酶消化处理：计算细胞数量，将胰酶消化下来的细胞进行300 g 离心5 min，收集细胞。每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy，用枪吹打直至看不
到细胞团块。
离心收集细胞，用PBS洗涤一次；每1-5×106个细胞加入500μl RNA-easy；用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
样本制备
▲ 研磨会部分影响RNA的得率和质量。
▲ 每500ul RNA-easy 试剂最多可以裂解50 mg常规组织，过多的样本量可能会导致裂解不充分，并使产物纯度降低。
▲ 部分良好的韧性或含较多外基质的组织，可能会出现不能全部溶解的现象，在步骤2中将进入沉淀中，不会影响后续 RNA 提取及RNA质量。
▲ 若没有条件用液氮研磨，可将新鲜组织尽量剪碎浸泡在RNA-easy中，用电动匀浆器高速匀浆至组织块全部裂解；或将新鲜组织充分浸泡在 RNA Keeper Tissue
Stabilizer (Vazyme #R501) 中，即可有效失活 RNase，再用 RNA-easy 处理并用电动匀浆器匀浆至全部裂解

培养细胞

贴壁细胞：
悬浮细胞：
将新鲜组织经液氮速冻后，迅速转移至液氮预冷的研钵中，用研杵研磨，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显可见颗粒)。
将研磨成粉的样品转移至离心管中，大约每25 mg组织加入500 μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent)，剧烈振荡或移液枪吹打，使样品充分裂解。
直接裂解：计算细胞数量，弃除培养液，每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy，用枪吹打使全部的细胞从壁上脱落，将裂解液转移至离心管中，
用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
胰酶消化处理：计算细胞数量，将胰酶消化下来的细胞进行300 g 离心5 min，收集细胞。每10 cm2 培养面积的细胞加入2-3 ml RNA-easy，用枪吹打直至看不
到细胞团块。
离心收集细胞，用PBS洗涤一次；每1-5 × 106 个细胞加入500 μl RNA-easy；用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。

提取流程
步骤 1
向上述裂解液中加入2/5体积的RNase-free ddH2O (每500μl RNA-easy使用200 ul)，剧
烈震荡15sec，室温静置5min。
步骤 2
室温，12,000×g离心 15 min。
步骤 3
取出离心管，小心吸取上层水相至一个新的离心管中。
步骤 4
加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置10 min。
步骤 5
使用12,000Xg室温离心 10 min，通常可以看见白色胶状沉淀，小心弃去上清。
步骤 6
加入 500 μl用 RNase-free ddH2O 配制的 75% 乙醇，上下颠倒数次，充分洗涤管盖和管壁，
并轻弹管底，让沉淀悬浮起来。
步骤 7
使用8,000×g室温离心 3 min，弃去上清。
步骤 8
重复步骤6和7一遍，弃尽上清 。   步骤 9
加入适量的 RNase-free ddH2O 溶解沉淀，室温涡旋 3 min ( 或使用移液器反复吹打 )，有效溶解样品。提取的 RNA 产物可以分装后在 -85 - -65°C长期保存，在 -30 - -15°C仅可短期保存。

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