BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书

分光光度法    50 管/48 样

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：

碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu²⁺还原成Cu⁺；2 分子的BCA 与Cu⁺结合，生成紫色络合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰zui强。

自备仪器和用品：

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 ml 玻璃比色皿和蒸馏水

组成：

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×1 ml），将试剂A 和B 按照 50：1 的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取：

1、液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。。

2、组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即待测液。

3 、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）： 细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定步骤：

1.     分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。

注意：空白管和标准管只需要做一次。计算公式：

Cpr (mg/ml) = C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

= 0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

Cpr (mg/g)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ W

= 0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ W W: 样本质量，g

注意事项：

BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验，若A 测定管－A 空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。