赖氨酸(lysine，Lys)含量测定试剂盒说明书

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。

测定原理：

蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。

组成：

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水、水浴锅。

赖氨酸提取：

样本烘干粉碎，称取约 0.01g 样本，加入 1ml 提取液，充分匀浆。80℃水浴提取 20min，冷却后 10000g

离心 10min，取上清待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：取 10ml 试剂一与 10ml 试剂二混合摇匀，取上清备用。用不完的试剂 4℃保存。

3、在有盖EP 管中加入下列试剂：

混匀，80℃水浴 30min（盖紧，以防止水分散失），冷却至常温。

混匀，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波长处记录吸光值A。△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。

赖氨酸含量计算：

a.  用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 0.0062x - 0.0212；x 为赖氨酸含量（µg/ml），y 为吸光值。

1.  按照蛋白浓度计算

赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照样本质量计算

赖氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V2：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量，g；1.1515，校正系数。

b.  用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为 y = 0.0031x - 0.0212；x 为赖氨酸含量（µg/ml），y 为吸光值。

1.  按照蛋白浓度计算

赖氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.  按照样本质量计算

赖氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.1ml；V2：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； W：样本质量，g；1.1515，校正系数。