CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针检测原理与注意事项

CFDA-SE可用于细胞示踪，也可用于细胞增殖检测。经CFDA-SE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA-SE常用于淋巴细胞的增殖检测，也可用于成纤维细胞，自然杀伤细胞，造血祖细胞等其他细胞的增殖检测。

检测原理

CFDA SE可以通过完好的细胞膜，进入细胞后被细胞内的酯酶催化分解成CFSE。CFSE可以随机地、不可逆地和细胞内蛋白的赖氨酸残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白，CFDA-SE标记细胞呈绿色荧光。CFDA-SE标记的分裂细胞每分裂一次，子代细胞的荧光会减弱一半，分裂一次的细胞荧光强度减半(1/2)，分离两次的细胞荧光强度再减半(1/4)，以此类推，荧光强度按照1/2，1/4，1/8，1/16的规律逐渐递减。

使用方法

1、保存液配制（5 mM）

   按需配制，如取DMSO 360 μL，溶解1 mg CFSE，超音波溶解，得到5 mM CFSE保存液,将其按40 μL体积分装于避光的无菌冻存管中，-20℃可保存2个月。

2、工作液配制

   取 5mM 的CFSE稀释液1μL，加入1mL10％FCS的PBS稀释。

3、染色

   (1) 重悬细胞。用有5％ FCS的PBS重悬细胞，细胞浓度一般为1x1x10^6/mL（体外实验）或1x1x10^7/mL（转染实验）。

   (2) 染色。1mL DFSE工作液与1mL细胞悬液混合后37℃孵育5~10 min。期间轻轻混匀2次。

   (3) 终止染色。用完培养液洗涤3次并离心。一般在第2次洗涤后再孵育5 min后进行第3次洗涤。冰冷的含10% 新生牛血清、RPMI-1640 medium（含L-谷氨酰胺）（货号：AC01L064），轻轻混匀1 min（用手轻弹，切忌吹打），1500 r/min 离心5 min。

(4) 流式细胞仪在FL1通道检测。

注意事项

 ✔ 所有试剂在使用前均需解冻、混匀，混匀过程中尽量避免产生气泡；CFDA SE溶剂在较低温度下会凝固，请于20-25℃水浴片刻至全部融化后再使用。

 ✔ 试剂中含有荧光染料，保存或进行标记时尽量避光操作，以避免荧光淬灭问题。

 ✔ 不同细胞的内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。可根据细胞类型及培养条件摸索最佳工作浓度。

 ✔ 若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如3.7%多聚甲醛于室温固定15 min；之后若还需要进行其他如抗体标记，请用冰丙酮透化处理细胞10min。

 ✔ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。