miRNA实验解决方案（操作手册）---第一章：miRNA简介

一、miRNA的合成途径
在动物细胞核中，miRNA基因的初级转录产物Pri-miRNA（长度大约为300～1000 nt）被RNase IIl-Drosha 酶切割成为发夹结构前体 miRNA（Pre-miRNA，长度大约为70～100nt）。经过初步剪切后，Pre-miRNA在转运蛋白Exportin-5的作用下由细胞核内转运到细胞质中，然后由另一种RNase Ill-Dicer 酶进一步切割产生成熟的miRNA（长度大约为21～23 nt）。成熟的miRNA与类似RISC的核糖体蛋白结合形成miRNA-RISC复合体，从而引起靶mRNA降解或者翻译抑制。miRNA参与胚胎发育、细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡、细胞死亡、免疫调节以及物质代谢等过程。

植物miRNA的形成过程全部是在细胞核中完成的，不存在Pre-miRNA从细胞核到细胞质转运过程。首先，细胞核中编码miRNA的基因在RNA聚合酶II的作用下转录形成Pri-miRNA，然后在Dicer酶-DCL1的作用下形成Pre-miRNA，DCL1继续作用于Pre-miRNA从而形成成熟的miRNA，以上过程均在细胞核中完成。成熟的miRNA或者是在细胞核中与类似RISC的核糖体蛋白结合形成miRNA-RISC复合体，然后被核转运蛋白HST运送到细胞质中，或者是先被HST运送到细胞质中，再与核糖体蛋白结合形成miRNA-RISC复合体。miRNA影响植物的生长发育、激素的调节、信号的转导、植物病害和应答环境胁迫。

二、miRNA的特性

miRNA最典型的特性就是两点--保守性和特异性。

·保守性

miRNA的结构和序列在物种之间几乎保持不变。

结构的保守性：无论动物体还是植物体，miRNA的生成途径都是由茎环结构的前体切割成为成熟体；

序列的保守性：miRNA的序列在不同物种中的差距极小。

·特异性

miRNA的表达分布具有时间区别和空间区别。

时间的特异性：在个体不同的发育阶段，miRNA的表达量不同；

空间的特异性：在个体的不同组织中，miRNA的表达量不同。

三、miRNA序列查找

常用的查找miRNA数据库--miRBase和TarBase。

该数据库提供已发表的miRNA序列，注释查询，定位，发卡序列以及命名服务等信息的数据库。

该数据库人工搜集了实验验证过的miRNA的靶基因，包括在人、小鼠、果蝇、蠕虫和斑马鱼中的miRNA的靶基因。

四、miRNA产品选择指南

Vazyme 为您提供miRNA专用的提取、逆转录、实时荧光定量PCR检测以及SmallRNA建库系列产品，并搭配最适miRNA引物设计软件，可直接进行成熟miRNA的实时荧光定量PCR高效检测，及Small RNA的文库构建。

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