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超高通量生物透射电镜的样品制备与操作

来源：奥达科学有限公司 2024年12月03日 17:02

　　超高通量生物透射电镜的样品制备与操作要求非常严格，以下是详细的步骤和注意事项：

　　一、样品制备

　　取材

　　新鲜取材是关键，组织或细胞必须保持新鲜，避免固定前的任何结构变化。

　　取材体积要小，一般控制在1~2mm³，以确保固定液能够充分渗透。

　　取材位置要准确，直接针对需要观察的目的部位，避免不必要的损伤。

　　操作过程中要保持低温，所有物品都要预冷，以防止样品结构变化。

　　固定

　　固定是为了保护样品结构，使其在后续操作中不受破坏。固定液由固定剂和缓冲液组成，缓冲液模仿细胞外液成分，维持稳定的pH值和渗透压。

　　新鲜取材后立即投入4℃预冷的固定液中，然后放入4℃冰箱固定保存。

　　对于无法下沉的样品，可以通过抽真空使其沉下去。

　　脱水

　　脱水是为了让包埋剂能够渗入组织内部。常用的脱水剂有酒精、丙酮等。

　　脱水时间不宜过长，常用逐级梯度脱水，如依次浸泡酒精浓度为30%、50%、70%、80%、90%、100%的溶液，一般浸泡时间为10~20分钟，最后可以用100%丙酮浸泡。

　　包埋

　　包埋包括渗透、包埋和聚合三个步骤。

　　配制包埋剂时，软硬度要易于调节，易于渗透。

　　包埋时要防止产生气泡，聚合时的温度要尽可能低。

　　切片

　　将经过渗透处理的样品包埋起来后，进行切片处理，获得70~90nm的切片。

　　染色

　　切片经柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液各染色5~10分钟，晾干后即可在透射电镜中观察。

　　二、操作要求

　　操作环境

　　透射电子显微镜需要在高真空环境下工作，因此样品必须保持干燥和清洁。

　　操作室内应保持恒定的温度和湿度，以防止样品在观察过程中发生变化。

　　操作技能

　　操作人员需要具备专业的知识和技能，熟悉透射电子显微镜的工作原理和操作流程。

　　在进行样品观察和拍摄时，需要掌握合适的放大倍数、焦距和曝光时间等参数。

　　安全防护

　　透射电子显微镜操作过程中需要接触高电压和高真空环境，因此必须采取严格的安全防护措施。

　　操作人员需要穿戴合适的防护服和手套，避免直接接触高压部件和真空系统。

　　维护与保养

　　定期对透射电子显微镜进行维护和保养，包括清洁镜头、检查真空系统、调整电子束等。

　　保持设备的稳定性和准确性，确保实验结果的可靠性。

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