过氧化物酶(POD)测试盒说明书

一、测定原理：上海哈灵生物科技有限公司生产的过氧化物酶(POD)测试盒利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm处吸光度的变化得出其酶活性。

二、试剂的组成和配制：（试剂盒有效期6个月）

• 试剂一：60mL液体×4瓶，4℃保存。

• 试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存。

• 试剂二应用液的配制：临用每瓶粉剂加入10mL的双蒸水溶解，4℃避光保存。（颜色变深以后弃用）

• 试剂三：5mL液体×1瓶，4℃保存。

• 试剂三应用液的配制：临用前用蒸馏水15～30倍稀释，使得在1cm光径、波长240nm下，蒸馏水调零时，试剂三应用液的吸光值保持在0.4左右，现用现配。若吸光值太高，则加蒸馏水稀释；若吸光值太低，则加入适量试剂三。（一般在25倍左右稀释）

• 试剂四：50mL液体×2瓶，4℃保存。

三、所需仪器及试剂：上海哈灵生物科技有限公司推荐使用可调420nm波长的可见光分光光度计及1cm石英光径比色皿，以及可调240nm波长的紫外光分光光度计，涡旋混合器，离心机，37℃水浴锅，秒表，蒸馏水，生理盐水等仪器和试剂。

四、操作步骤：

1. 前处理：

• 植物组织匀浆的制备：准确称取植物组织重量，按照重量（g）:体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（推荐使用生理盐水(0.86%或0.9%的NaCl水溶液)或磷酸盐缓冲液︰0.1mol /L pH7～7.4），冰水浴条件下制备成10％的组织匀浆液，3500转/分离心10分钟后，取上清液进行测定。

2. 操作表：

• 测定管 对照管

• 试剂一 (mL) 2.4 2.4

• 试剂二应用液(mL) 0.3 0.3

• 试剂三应用液(mL) 0.2

• 双蒸水(mL) 0.2

• 样本(mL) 0.1 0.1

• 37℃水浴准确反应30分钟

• 试剂四(mL) 1.0 1.0

• 混匀后，3500转/分离心10分钟，取上清于420nm处，1cm光径，双蒸水调零，测定OD