WB实验选择普通胶or梯度胶？

蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

     实验过程中，是选择一个浓度的胶来进行样本的分离，还是选择梯度胶，普通胶和梯度胶两者之间有怎样的差别？

普通胶和梯度胶两者的差别：

1 、首先，梯度凝胶比普通胶的分离范围更宽，可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。普通胶电泳对于分子量超过其分离范围的蛋白质，过大或过小，都不能分离。

2、而梯度凝胶孔径范围比普通胶大，分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部大孔径部分得到分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部小孔径部分得到分离，所以分子量较大和较小的蛋白质可以同时得到分离。

3、梯度凝胶可以分辨分子量相差较小，在普通胶中不能分辨的蛋白质。电泳过程中，蛋白质在梯度凝胶中迁移，经过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不能通透。

4、电泳过程中蛋白质被浓缩，集中在一个很窄的区带中，而分子量略小的蛋白质，可以迁移得更靠前一些，被集中在略前面的区带中。由于梯度凝胶孔径逐步变小，在蛋白质不能通透的孔径附近，对蛋白有浓缩作用。

5、电泳后形成很窄的区带，可以分辨出分子量相差较小的蛋白质。对于太稀的样品，在电泳过程中可以将样品分几次加样，大小不同的蛋白质分子最终都会滞留在其相应的凝胶孔径中而得到分离。

6、可以直接测定天然状态蛋白质的分子量而不需要解离为亚基，因此这一方法可以与SDS-PAGE测定分子量的方法互为补充。

不同浓度普通胶和梯度胶的效果展示：

• 10%浓度的胶在20-100kDa的范围分离比较均匀
• 15%浓度的胶在分离特别小分子的蛋白时，分的比较开，但是大分子就很难分离开
• 梯度胶在5-400kDa范围，蛋白分布都比较均匀，且都分离比较明显，所以如果有大小蛋白同时想分离在一块胶时，梯度胶的效果就非常明显了。