植物组织蛋白质提取方法

方法一：

1. 1. 根据样品重量（1g 样品加入3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。

2. 2. 样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。

3. 3. 用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

4. 4. 提取上清夜，样品制备完成。

5. 5. 蛋白质提取液：300ml

6. 1Mtris-HCl（PH8） 45ml

7. 甘油（Glycerol）75ml

8. 聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g

9. 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！

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方法二：

1. 用三氯醋酸—丙酮沉淀法，这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！

2. 1. 在液氮中研磨叶片

3. 2. 加入样品体积3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1 小时）弃上清。

4. 3. 加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。

5. 4. 上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1 小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。

6. 5. 用Brandford 法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。

7. 提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮

8. 裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。

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