每年的5月8号是“世界卵巢癌日”,根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球癌症发病数据报告显示:2020年中国新发癌症病例457万例,其中男性248万例,女性209万例,2020年中国癌症死亡病例为300万例,其中男性182万例,女性118万例,在妇科三大肿瘤中卵巢癌的死亡率。
图.2020年中国女性癌症新发病例数类型
卵巢癌类器官(organoids)是指利用卵巢瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。卵巢癌类器官可以作为疾病模型,相较于传统2D疾病模型,其在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近,能作为卵巢癌治疗、诊断和发病机制研究的理想试验模型。
卵巢癌类器官构建
1、取材:标本离体后,尽快取材。采用无菌器械,保证无菌环境,将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的 15 mL 离心管中,4℃转运。
2、清洗:在生物安全柜中取出样品管,去除组织保存液,加入适量冷的添加有双抗的 PBS,反复清洗后,去除 PBS。
3、重复清洗:重复第 2 步骤 3 次。
4、组织处理:去除 PBS缓冲液后,将组织块移至10 cm含10 mL冷原代 组织保存液的无菌培养皿中,用无菌眼科显微剪将组织剪碎(直径约 0.5mm~1mm)。
5、重复清洗:使用常温PBS,重复第2步骤3次。
6、收集组织碎片,加入组织消化液消化20~30 min,过70 μm筛网,收集卵巢癌细胞。
7、红细胞裂解:加入10 mL红细胞裂解缓冲液,室温下在翘板摇床上摇10 min。
8、重复清洗:裂解完毕,使用常温 DMEM/F12,重复第 2步骤3次。
9、类器官种板:调整细胞密度为2~3×106,与基质胶1:1均匀混合,将细胞混悬液以40-60 uL每孔种在24孔板中,37℃放置15~30 min,加入预热的类器官培养液,每个孔 750 uL。
10、类器官培养:将培养板放在 37℃ CO2培养箱培养,每2天更换培养液。加入培养液时,吸头朝向侧壁,缓慢加入。
11、类器官观察:每天观察类器官并拍照,了解初始类器官数量、增殖速 度、形态、微生物污染情况等。
实验结果
图.卵巢癌类器官不同周期培养结果(P为培养代次,d为培养时间)
FAQ
基质胶的操作要注意哪些事项?
所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。
获取临床样本,如何避免污染?
①取材时尽量保证无菌取材;
②提取前可以用含双抗的PBS浸泡几分钟:常见与外界环境有接触可能的胃、肠、膀胱等位置肿瘤建议用含3%~5%双抗的PBS浸泡5-10 min,其他常见肿瘤用含1%~2%双抗的PBS浸泡5min左右;
③提取细胞过程中所用试剂均加1%双抗及合适浓度的原代抗生素。
肿瘤组织采集、保存、运输注意事项
尽可能多采集肿瘤细胞含量高的肿瘤组织,并缩短组织样本在空气中暴露的时间,以减少污染概率;采集的肿瘤组织样本尽快置于装有专用样本保存液的无菌管中,低温(4 ℃左右)下快速运转至检测单位(尽量保证采样后2~4 h内送到)。
病灶和癌旁培养出的类器官有区别吗?肿瘤组织的取材部位有什么要求?
有差别,肿瘤本身具有异质性,不同来源的类器官之间存在差异是很常见的现象,从形态上看,原发病灶来源的类器官比癌旁来源的类器官更具有侵袭性的结构,一般病灶形态上更加不规则一些。如果希望在建模或药物筛选方面尽量减小误差,可以在活性好的地方多位置取样。
产品选择
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 组织消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid类器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary® Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human)卵巢癌类器官生长培养基 | 41433ES60/76 | 100/500 mL |
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基本浓度 | Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生长因子 | Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR, Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高浓度 | Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干细胞专用 | Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
类器官专用 | Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I | 40125ES10/50 | 2/10 mL | |
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾胶原蛋白I型 | 40136ES10/50 | 2/10 mL |
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