乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)
产品货号:BA1698
产品规格:50T
产品简介:
乳酸(Lactic acid,LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物,是一种含有羟基的羧酸,分子式是C3H6O3,参与生物化学很多反应过程。乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。其中,酶催化法是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸氧化,生成丙酮酸和NADH,通过分光光度法或荧光光度法测定NADH的生成量,进而计算出乳酸含量。
乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD存在条件下,乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸,同时生成NADH。在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物,并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向,驱动反应完成,生成的NADH与乳酸为等量摩尔。通过分光光度比色法测定340nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出LD水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的乳酸含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
50T | 保存条件 | |
试剂(A):乳酸标准(20mmol/L) | 1ml | -20℃ 避光 |
试剂(B):乳酸标准稀释液 | 1ml | RT |
试剂(C): C1:LD Assay buffer | 15ml | 4℃ 避光 |
LD显色液 C2:NAD buffer | 2支 | -20℃ 避光 |
C3:LDH solution | 50μl | -20℃ 避光 |
临用前,按C1:C2:C3=7.5ml:1支:20μl比例混合,即为LD显色液。 | ||
试剂(D):LD终止液 | 200ml | RT |
需自备的仪器和用品:
离心管或小试管、蒸馏水、水浴锅或恒温箱、比色杯、分光光度计。
操作步骤:
1. 准备样品:
血浆、血清、尿液及其他体液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存。
细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-20℃冻存,用于LD的检测。
高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的LD,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
2. 配制标准品工作液:取乳酸标准(20mmol/L)0.1ml溶解于0.3ml乳酸标准稀释液,使浓度达到5mmol/L,即为标准品工作液-乳酸标准(5mmol/L)。4℃避光保存2个月有效。
3. LD检测:按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气
泡。如果样品中的LD浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。
加入物 | 空白管 | 对照管 | 标准管 | 测定管 |
蒸馏水/μl | 6 | 300 | — | — |
待测样品(血清、血浆、体液等)/μl | — | 6 | — | 6 |
乳酸标准(5mmol/L)/μl | — | — | 6 | — |
LD显色液/μl | 300 | — | 300 | 300 |
混匀,37℃水浴准确保温5min,立即加入终止液终止反应。 | ||||
LD终止液/ml | 1.8 | 1.8 | 1.8 | 1.8 |
4. 用分光光度计检测,以蒸馏水调零,比色杯光径1.0cm,读取空白管、对照管、标准管、测定管的340nm吸光度(即A空白、A对照、A标准、A测定),一般应数小时内检测完毕。
计算结果:
血清、血浆、尿液、脑脊液乳酸(mmol/L)={(A测定−A对照)/(A标准−A空白)}×5
组织乳酸(mmol/g)={(A测定−A对照)/(A标准−A空白)}×5/待测样品蛋白浓度(g/L)
式中:A测定=测定管的吸光度值
A对照=对照管的吸光度值
A标准=标准管的吸光度值
A空白=空白管的吸光度值
参考区间:
健康成年人安静状态空腹静脉血 0.6~2.2mmol/L
健康成年人安静状态空腹动脉血 0.3~1.47mmol/L
健康成年人尿液乳酸排出量 5.5~22mmol/d
新生儿毛细血管血 1.2~4.4mmol/L
0~16 儿童脑脊液 1.1~2.8mmol/L
注意事项:
1. 本法适用于自动分析仪,分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率,计算乳酸的浓度。
2. 如果没有分光光度计,也可以使用酶标仪测定。
3. 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检,尽快分离出血浆等。
4. 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。
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