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全能核酸酶的使用,你学会了吗?

来源:上海玮驰仪器有限公司   2024年05月24日 11:05  

逐典Pannarase全能核酸酶作为一种非特异性核酸内切酶,展现出了优势。其来源于Serratia marcescens,能够在多种条件下高效降解各种形式的DNA和RNA,生成特定大小的寡核苷酸残基片段。这种酶对核酸碱基序列没有特异性要求,意味着它可以在核酸链内的任意位置进行切割,从而大大提高了去除残留核酸的效率。

Q1:使用过程中,如何保证让酶活力处于最佳?

A:pH和温度控制很重要,最适pH在8.0,不过6-10之间也可使用,最高活性温度是37℃,酶活性温度范围0~42°C。

Q2:关于存放问题,如果临时使用会不会影响后期?

液体有效期为1年。打开包装使用后,如果在 2~8ºC 环境下放置超过1周时间,建议过滤除菌,防止微生物污染。

Q3:样品中含有EDTA,盐酸胍等成分,我们需要注意什么?

常用试剂对全能核酸酶的活性有抑制作用,反应条件不适合容易加长反应时间,影响实验进度

Q4:不同应用途径中应该添加多少全能核酸酶比较合适呢?

具体的核酸酶添加量会根据不同的实验用途而有所不同,以下是一些简单参考,具体操作和数据调整还需要经过实验验证:

真核细胞裂解液:为了降低细胞裂解液黏度,缩短处理时间,改善分离效果,可以参考细胞数来添加。比如一般为106~107个细胞添加1μl即500单位的核酸酶。

纯化后的疫苗病毒:由于DNA含量较少,可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。

Q5:哪些缓冲液可以用于稀释?

稀释液缓冲液: 20 mM Tris-HCl(pH 8.0),2 mM MgCl2,20 mM NaCl。不需要无菌的可以直接加入,若有无菌要求,建议将酶用buffer稀释,然后用0.2μm的膜除菌过滤后加入。酶被稀释后尽快用掉,避免反复冻融。

Q6.倘若反应温度无法达到最适温度37℃,如何保证核酸酶消化效果佳?

当反应温度过低的情况下,推荐延长反应时间来保证消化效果。

Q7.实验过程中遇到需要蛋白变性环境,对核酸酶是否有影响?

在问题三中已列举出如SDS、尿素等试剂都会影响到核酸酶的酶活,随着浓度与时间的增加,核酸酶会出现变性失活,可通过控制抑制剂浓度范围及提高核酸酶浓度来补偿抑制因素影响。

Q8.核酸酶的使用时间

可以选择在细胞收获前、澄清后或是纯化后用广谱核酸酶处理样品,一般选择在收获前或澄清后处理,可以提高病毒得率。

早期使用:可以减少大的DNA片段,并且可以在下游纯化步骤中去除残留的核酸酶。 但为了去除样品中大量的核酸,必须使用大量的酶。

后期使用:节约了核酸酶的用量,降低成本;但必须增加一个去除广谱核酸酶残留的步骤,并且,采用这种方式可能会导致病毒的得率减少。

逐典Pannarase全能核酸酶优势:

1.无动物源性、无氨苄青霉素

2.杰出单位比酶活、更高效的核酸降解能力

3.先进的生产工艺,非传统His标签纯化、排除引入金属离子风险

4.严格的质控标准,内毒水平低,确保单位酶活的准确性以及批次间稳定性

全能核酸酶应用条件:

全能核酸酶的酶活会受到多种因素的影响(例如温度、pH、离子强度等),故用量范围也会从0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此,不同的操作环境下酶的最佳浓度不同,需要通过实验设置梯度进行最佳条件的摸索。

应用实例:

1.样品:狂犬病毒浓缩液

处理条件:核酸酶浓度50~90U/ml ,

37 ℃处理 2 h,转入18 ~ 26 ℃处理 6h





2.样品:狂犬病病毒浓缩液

处理条件:25、50和100 U/ml,37℃




3.样品:流感病毒浓缩液

处理条件:10 U/mL,37℃





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