石蜡切片是一种常见的组织学技术,用于观察组织的微观结构。在进行石蜡切片实验时,有许多细节需要注意,这些细节往往决定了切片的质量和结果的准确性。那么石蜡切片Protocol实验需要注意哪些要点呢?本期内容将为你揭示一些关键的细节,助你获得最佳的石蜡切片效果。
1. 组织固定
1)取新鲜组织,分割块的大小,宜小不宜大,一般不超过1cm3,用预冷的PBS冲洗,置于10%的福尔马林固定液中固定24小时。
2)取出组织,蒸馏水冲洗30分钟。
2. 组织脱水,包埋,切片
1)自动脱水:设定脱水程序,70%酒精30min----80%酒精2小时----95%酒精2小时----95%酒精2小时----100%酒精2小时----100%酒精2小时。脱水的目的是除去组织中的水分,便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行,因为这些程序中所用的药品都不能与水混合,所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行,不能操之过急或时间过长,以免组织变硬变脆或发生收缩现象。
2)透明: 二甲苯, 30min/次,2次。透明的目的是将脱水剂从材料中除去,使材料透明,增记折光系数;同时便于下步的浸蜡和包埋等程序(因为酒精不能溶解石蜡)。透明剂是一种既能与脱水剂混合,又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯和氯仿,适用原则也是逐级进行,可减少材料收缩。
3)浸蜡: 组织经透明后放入熔化的石蜡(熔点为52℃)内,1小时/次,3次。浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中,溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去,最后使透明剂wan全被石蜡取代,以便切片。浸蜡过程一般是从低温到高温、从低熔点到高熔点逐渐进行,这一过程不能操之过急,否则浸蜡不che底影响切片。此外,软材料可用熔点较低石蜡,较硬的材料可用熔点较高的石蜡;冬季可用熔点较低的石蜡,夏季可用熔点较高的石蜡。石蜡必须纯净,不含杂质。整个浸蜡过程需在恒温箱内进行。
4)包埋:将熔化的石蜡倒入包埋框再将组织块放入,放入时不能有气泡,冷却台上冷却30分钟。注意将样品编号封于蜡块上,以免样品混淆。
5)常规石蜡切片:厚度6um,连续切片。
6)石蜡切片脱水:60℃烤片30min,可室温保存。
以上就是有关于石蜡切片Protocol实验需要注意哪些要点的问题解答,如果你想要了解更多,请咨询百奥创新客服!
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