石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于观察组织的微观结构。在进行石蜡切片实验时，有许多细节需要注意，这些细节往往决定了切片的质量和结果的准确性。那么石蜡切片Protocol实验需要注意哪些要点呢？本期内容将为你揭示一些关键的细节，助你获得最佳的石蜡切片效果。

1. 组织固定

1）取新鲜组织，分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，用预冷的PBS冲洗，置于10%的福尔马林固定液中固定24小时。

2）取出组织，蒸馏水冲洗30分钟。

2. 组织脱水，包埋，切片

1）自动脱水：设定脱水程序，70%酒精30min----80%酒精2小时----95%酒精2小时----95%酒精2小时----100%酒精2小时----100%酒精2小时。脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。

2）透明: 二甲苯, 30min/次，2次。透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因为酒精不能溶解石蜡）。透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯和氯仿，适用原则也是逐级进行，可减少材料收缩。

3）浸蜡: 组织经透明后放入熔化的石蜡（熔点为52℃）内，1小时/次，3次。浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂wan全被石蜡取代，以便切片。浸蜡过程一般是从低温到高温、从低熔点到高熔点逐渐进行，这一过程不能操之过急，否则浸蜡不che底影响切片。此外，软材料可用熔点较低石蜡，较硬的材料可用熔点较高的石蜡；冬季可用熔点较低的石蜡，夏季可用熔点较高的石蜡。石蜡必须纯净，不含杂质。整个浸蜡过程需在恒温箱内进行。

4）包埋：将熔化的石蜡倒入包埋框再将组织块放入，放入时不能有气泡，冷却台上冷却30分钟。注意将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。

5）常规石蜡切片：厚度6um，连续切片。

6）石蜡切片脱水：60℃烤片30min，可室温保存。

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