细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。既可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,又起到了细胞保种的作用。那么你知道细胞冻存的注意事项有什么吗?让我们一起来看看吧!
1. DMS0稀释时会产生巨大的热量,不能直接添加到细胞液中,需预先配制,且DMSO必须是细胞培养级别的;
2. 缓慢冷冻,使细胞逐渐脱水,以免因形成巨大的冰晶而受损;
3. 选择生长良好、密度约为80-90%、活力超过90%的细胞进行冻存;
4. 当细胞密度低于5x105个活细胞/mL时,复苏成功的几率较低;
5. 不宜长时间将细胞保存在-80°C的冰箱中。我们建议将其放入液氮中保存,并确保在-80°C的冰箱中保存的时间不超过48小时;
6. 在冻存细胞操作时,请佩戴防护眼镜和手套,以免受到液氮的冻伤;
7. 务必拧紧冻存管的盖子,以免在复苏过程中渗水,导致支原体污染;
8. 定期检查液氮储备,确保所有细胞浸没在液体之下;
9. 在每个冻存管上标明细胞的名称和冻存时间,并记录在册,以避免取错细胞或找不到冻存管的情况发生;
10. 在-20°C的冰箱中将细胞放置的时间不应超过1小时,以防止冰晶过大而损坏细胞。
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