产品推荐:气相|液相|光谱|质谱|电化学|元素分析|水分测定仪|样品前处理|试验机|培养箱


化工仪器网>技术中心>其他文章>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

荧光素酶报告基因检测常见问题解惑答疑

来源:上海玮驰仪器有限公司   2024年05月15日 16:28  

Q:荧光素酶报告基因检测主要有哪些用途?
a.启动子结构分析,将启动子区域序列(通常2k左右)进行分段截短,或对特定位点进行突变,再分别构建入luciferase报告载体,检测其启动子活性。
b.启动子SNP分析,一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性,可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。
c.验证特定转录因子同其调控序列的作用,将该序列(通常为启动子区域)插入报告基因载体,同时在实验细胞中共转过表达该转录因子,可分析转录因子过表达是否提高荧光素酶活性。
d.可以分析信号通路是否激活,将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体,在不同上游信号条件下,荧光素酶活性代表了通路的下游响应。例如在GPCR研究中,将cAMP response element(CRE)载入报告基因载体,构建稳定表达细胞株后,可以用于分析GPRC的激活与抑制剂筛选。又如,将HIF1α的响应原件hypoxia-responsive element (HRE)插入luciferase报告载体构建稳转细胞株,可以用于低氧相关通路的研究。
e.验证microRNA的靶序列,将待测的3’UTR序列插入报告基因载体,再共转入该microRNA,如果荧光素酶活性下降,则提示为其靶序列。

Q:做荧光素酶报告基因检测,需要提供什么?实验结果包括哪些?
您需要提供:1.基因序列或模板,需提供详细的转录因子、目的基因或microRNA信息;2.实验细胞,默认为使用293T细胞,
实验结束后,会为您提供实验流程及完整报告一份,包括实验原始数据、图片、分析结果等。

Q:荧光素酶作为报告基因相比于荧光蛋白有哪些优势?
Luciferase的灵敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同时具有更宽的动态范围,便于数值分析比较,不需要荧光显微镜,而且在活体实验中其荧光穿透性高于EGFP等荧光蛋白,同时由于没有内源活性、其本底信号很低。
而GFP等荧光蛋白相比于荧光素酶的优势在于可以进行失踪定位,并且其观测不需裂解细胞,方便进行适时观察。

Q:海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶相比,相对活性如何?
在氧、镁和ATP的存在下,萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素,而来源于海洋腔肠(Renilla reniformis)的荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。双报告基因技术(Dual-reporter assays),结合了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试。

CHASELECTION逐典萤光素酶报告基因检测试剂盒旨在准确、灵敏、高效地测定萤火虫萤光素酶活性,应用高通量药物筛选、药物活性检测、大规模启动子功能测定、信号通路等研究。

逐典萤光素酶报告基因




针对报告基因检测不同的侧重需求,逐典推出了3种检测系统。




逐典萤光素酶报告基因优势:

1. 检测灵敏度高,信号稳定性好

HEK293-NFK B-LUC细胞加入梯度稀释的TNF 在37C、5%CO条件下刺激6小时后,分别用增强型、超敏型、稳定型检测试剂进行信号检测。




2. 操作方便

仅需将底物和萤光素酶检测缓冲液混合后直接加入到细胞即可。




3. 稳定性好

同时在10次反复冻融实验中,逐典全系列报告基因检测试剂盒显示出较强的稳定性。





免责声明

  • 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618