ELISA实验所有方法的缺点很明显:
1、重复性不好;
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;
3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。
直接法(direct ELISA)
将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。
缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。
间接法(indirect ELISA)
此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。
缺陷:交互反响发作的机率较高。
双抗体夹心法(sandwich ELISA)
被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。
优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。
缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。
竞争法(competitive ELISA)
样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够联系越多的抗体,而固定抗原就只能联系到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。
优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。
缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。
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