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荧光分析法

来源:上海笃玛生物科技有限公司   2024年05月14日 13:26  

荧光分析法

荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态,激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光,可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光(或荧光很弱),这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂(如荧光染料),使其与不发射荧光的物质生成络合物,各种络合物能发射荧光,再进行测定。因此荧光试剂的使用,对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门,扩展了分析的范围。

特点:灵敏度更高

 

 

 

 g/ml,应用不如UV广泛。

应用:①直接荧光光度法

②作为HPLC的检测器(用的多)

根据物质分子吸收光谱荧光光谱能级跃迁机理,具有吸收光子能力的物质在特定波长光(如紫外光)照射下可在瞬间发射出比激发光波长长的光,即荧光。

 

 分子受特定光照射后处于激发态

 

 分子返回基态时发出荧光,其荧光强度

 

 呈线性关系,从而可测出气体浓度。当检测仪器系统确定后,荧光总光强I与

 

 浓度的之间的关系可表示为:

I=KC

在稳定的条件下,这些参数也随之确定,k可视为常数。因此,式中I=kC表示的紫外荧光光强I与样气的浓度C成线性关系。这是紫外荧光法进行定量检测的重要依据。

直接测定法

利用物质自身发射的荧光进行测定分析 [1]

间接测定法

不管是直接测定,还是间接测定,一般的采用标准工作曲线法,取各种已知量的荧光物质,配成一系列的标准溶液,测定出这些标准溶液的荧光强度,然后给出荧光强度对标准溶液的浓度的工作曲线。在同样的仪器条件下,测定未知样品的荧光强度,然后从标准工作曲线上查出未知样品的浓度(即含量)。

一般常用的荧光分析仪器有:目测荧光仪(荧光分析灯)、荧光光度计和荧光分光光度计三种。


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