原理:氯化铵是红细胞裂解液的主要效应物质,氨根离子不能通过细胞膜,而其他离子可以通过,造成细胞内外的离子浓度差异,形成了渗透压差,外部的水分会扩散至细胞内,使红细胞膨胀,达到裂解的效果。
使用说明:
组织细胞样品:
1.新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液,离心弃去上清液;
2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入3-5ml裂解液),轻轻吹打混匀;
3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液;
4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次;
5.如裂解不好可重复步骤2和3;
6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液中进行。
血细胞:
1.新鲜抗凝血,离心弃去上清液;
2.取出4℃冰箱预冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入6-10ml裂解液),轻轻吹打混匀;
3.800-1000rpm离心5-8分钟,离心弃去上层红色清液;
4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或无血清培养液离心洗2-3次;
5.如裂解不好可重复步骤2和3;
6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用DEPC水配制的溶液进行。
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