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在生物制品生产过程中，会伴随宿主细胞杂质残留。其中宿主残留DNA可能会引发潜在的安全问题（如潜在致瘤性、传染性，甚至增加免疫源性或导致突变），所以相关的法律法规相继出台以对生物制品中外源宿主DNA残留量进行严格把控。药监局规定，细胞表达产物的最终产品中残留DNA含量应尽可能低。《中华人民共和国药典》2020年版第三部规定，外源性DNA残留检测采用DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。前2种传统方法存在序列特异性低、灵敏度低、重现性差、通量低、耗时长等缺点，不利于精确控制生物制品中DNA残留量。
翌圣生物基于荧光探针qPCR原理，研发了包括CHO、HEK293、E.coli、Vero、Human、MDCK、汉逊酵母、毕赤酵母等一系列快速专一的宿主细胞残留DNA检测试剂盒。最近，全新推出的HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(3G) (41331ES)和CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(3G) (41332ES)，可检测低至几十bp高丰度残留DNA片段，定量下限(LLOQ)亦可低至fg/μL。其中，CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(3G) 1h内即可完成qPCR反应，检测下限(LLOD)为0.05fg/μL。
产品优势
灵敏度高：基于荧光探针qPCR方法开发，LLOD低至0.05fg/µL；
准确性高：样本加标回收率在70%~130%范围内；
专属性强：与无关DNA无交叉反应，减少检测的假阳性；
符合法规：按照Chp、USP、ICHQ2(R1)等要求进行全面验证，性能符合中外法规标准；
配合审计：产品生产符合ISO13485质量体系标准，有完善的审计文件;
保障品质：试剂盒原材料全自主研发，qPCR Mix等酶产品在超洁净酶工厂生产。
产品数据
1.CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒（3G）线性范围为：3fg/μL~300pg/μL，R2=1，扩增效率为99.29%，各浓度检测值CV<15%。
图1. CHO DNA (3G)标曲线性图（左）和扩增曲线线性图谱（右）
2.检测标曲 浓度点3fg/uL及以下浓度的CHO DNA (3G)，每个浓度10个重复。结果显示，在0.3fg/uL及以上浓度，CV<20%，即CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(3G)的定量限为0.3fg/uL。
图2. 0.3fg/μL CHO DNA qPCR检测结果
表1. CHO DNA (3G)定量限为0.3fg/μL
3.检测定量限0.3fg/μL及以下浓度的CHO DNA (3G)，每个浓度20个重复。结果显示，在0.05fg/μL及以上浓度20个重复孔的检出率≥19（即检出率≥95%），即CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(3G)检测限可达0.05fg/μL。
图3. 0.05fg/μL CHO DNA (3G) qPCR检测结果
评估与CHO DNA (3G)亲缘性较高的小鼠物种基因组DNA以及生物制品生产中常用的细胞基因组DNA对CHO DNA检测试剂的干扰，干扰组与对照组扩增曲线重合，未见干扰（下图依次为Mouse、HEK293和E.coli基因组DNA对CHO DNA检测试剂的干扰数据）。
图4. CHO DNA (3G)试剂盒干扰实验结果
产品信息
产品 | 货号 | 名称 | 规格 |
样本前处理 | 18461ES | MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(瓶装) | 25T/100T |
18467ES | MolPure® Mag48 Sample Preparation Kit FN 磁珠法48孔样本前处理试剂盒FN（预封装) | 3×16T/ 6×16T | |
核酸提取仪器 | 80511ES | 48通道自动化核酸提取仪 | 48通量 |
残留DNA检测 | 41331ES | HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(3G) | 50T/100T |
41332ES | CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(3G) | 50T/100T |
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Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒（2G） | 41307ES |
E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒（2G） | 41308ES |
汉逊酵母宿主细胞DNA残留检测试剂盒 | 41317ES |
MDCK宿主细胞DNA残留检测试剂盒 | 41319ES |
质粒DNA残留检测试剂盒 | 41323ES |
Human宿主细胞DNA残留检测试剂盒 | 41325ES |
毕赤酵母宿主细胞DNA残留检测试剂盒 | 41328ES |
Vero宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒 | 41314ES |
HEK293宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒 | 41316ES |
Human宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒 | 41326ES |
E.coli宿主细胞RNA残留检测试剂盒 | 41318ES |
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