ATCC细胞操作指南

细胞和细胞株

冻存的ATCC 细胞株和杂交瘤细胞株通过干冰运输。收到冻存细胞后，需立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DMSO）后进行细胞培养。

如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐气

冻存细胞的复苏和培养

1. 准备细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明书推荐的相应细胞培养基，平衡温度和pH（CO2），37℃水浴加热细胞培养基。

2. 小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴，轻微搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，

短于2分钟或待最后一块小冰晶体刚融化，即将细胞冻存管取出水浴。

3. 给取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用无菌纸或纱布拭干。之后的操作步骤应在生物安全柜中无菌操作。

4. 小心拧开冻存管的顶部，将管内容物用1 mL移液枪转移到含9 mL培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟（125 × g ），

小心吸去上清液以去除抗冻剂（DMSO），避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于1或2 mL配好的培养基中。将细胞悬液转移到含有

培养基的培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀分布。生长较慢的细胞株可重悬于5～8 mL培养基并转移到T25培养瓶。

生长较快的细胞株可重悬于12～20 mL培养基并转移到T75培养瓶。ATCC记载有各细胞株的具体生长状况及培养方法。

5. 将细胞培养容器置于细胞培养箱，在37℃，5%二氧化碳浓度的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后在显微镜下观察细胞形态和生长

状况（请参阅: *注2）。

*注1：虽然大多数细胞株可以在一种以上的培养基中生长，但细胞的特征可能会在更换不同种培养基时发生变化。为保证最佳效果，

请用ATCC推荐的培养基培养细胞，若配套培养基不能购买，ATCC可以提供培养基配方。

*注2：某些细胞株，如杂交瘤株，可能需要几天的时间才从冻存状态下恢复正常生长。细胞复苏培养第一天可能会呈现较低的细胞活力

并产生一些细胞碎片。度过这一时期后，细胞会恢复并进入指数增长期。相层存储。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。

如果温度不够低，高于-130℃，细胞活力会迅速下降。