abm的脂质体转染试剂是一种特别的聚阳离子和脂质体配方,保证在包括原代细胞在内的多种细胞类型中具有高转染效率。
艾美捷脂质体转染试剂(ABS-G2500):
单位:1.0 毫升
存储条件:存储于4ºC。请勿冷冻。
特点:
Z小毒性
在一系列细胞中表现Z越
应用:
将DNA转染到培养的贴壁真核细胞中。
脂质体转染试剂使用方法:
请使用以下条件作为指导,以在6孔板或35毫米培养皿中转染哺乳动物细胞。
1. 在转染前18至24小时,以70%的密度播种细胞。对于悬浮细胞,以5 x 10^5 细胞/毫升的密度播种。
2. 对于每个转染样本,请按以下方式准备复合物:
溶液A:将2.0微克的DNA稀释到100微升无血清、无抗生素的培养基中。
溶液B:在使用前通过弹动试管混合DNAfectin™ Plus,然后将6-10微升的DNAfectin™ Plus稀释到100微升无血清、无抗生素的培养基中。
在室温下孵育溶液A和溶液B 5分钟。
3. 合并溶液,轻轻混合以确保均匀分布,并在室温下孵育20分钟。
注意:复合物在室温下稳定3-5小时。
4. 向每个DNA-转染复合物中加入0.8毫升无血清培养基,并通过剧烈弹动试管充分混合。
5. 抽吸每个孔中的所有培养基,然后将1.0毫升的转染试剂复合物直接加入到每个孔中(对于贴壁细胞)。对于悬浮细胞,收集细胞并以300xg离心以收集细胞沉淀,用1.0毫升转染复合物重悬。然后将细胞和转染复合物转移到6孔板中。孵育细胞。
6. 在5-8小时后,移除转染溶液,加入2.0毫升完整培养基(含血清和抗生素)。继续孵育细胞。
7. 在48-72小时后,可以使用适当的检测方法分析转基因的表达,或继续进行稳定细胞系的生成。
8. 制造稳定细胞系:在存在选择标记的情况下,以与杀伤曲线确定中使用的密度相同的密度进行细胞传代。
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