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酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔板中的待测标本。该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号，电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果。
光是电磁波，波长100nm-400nm称为紫外光，400nm-780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
酶标仪，即酶联免疫检测仪，用来检测ELISA反应后的吸光度值，主要由光路系统与信号采集系统组成。工作原理为：
光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上；
分为滤光片式酶标仪(固定波长酶标仪)、光栅式酶标仪(全波长酶标仪)，这两种都是属于光吸收酶标仪；
滤光片是光学玻璃片镀制光学膜层，使滤光片对通过的波长发生变化，将不需要的波长光隔开。根据选配的滤光片，只能截取特定波长进行检测。
光栅：就光栅分光后的一点而言，光是纯的，但由于透光孔具有一定宽度，比色皿所接受的光，是一个在波长附近波段上的等强的光。
滤光片：经滤光片分光后，通过透光孔被比色皿所接受的光也是一个波段，但在波长上光的强度最高，呈正态分布。
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