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酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术，由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年描述。该测定依赖于抗原-抗体相互作用的原理，并利用酶和比色检测来量化目标分子，主要用于检测和量化生物样品中特定蛋白质、肽、抗体或抗原的存在。ELISA测定通常应用于各个领域，包括临床诊断、药物研究和生命科学基础研究。那么你知道ELISA实验常见问题及解决方法吗？让我们一起来看看吧！
一、高背景
原因：洗板不充分、Streptavidin-HRP 加样量过高、孵育时间是否过长、样本的交叉污染
解决方法：检查洗板是否按要求进行；洗板不充分；浓缩洗涤液有结晶就使用，导致洗涤不充分；检查SA-HRP是否按要求的浓度配制；检查孵育时间是否按要求进行；注意实验过程中可能造成样本交叉孔间反应的操作。
二、无信号值
原因：试剂使用顺序错误、试剂配制错误、试剂配制浓度错误
解决方法：检查试剂使用顺序是否存在问题，重复测试；检查是否存在试剂配制错误；检查试剂是否因标准蛋白、抗体或SA-HRP浓度配制过低造成信号值无。
三、过强的信号值
原因：洗板不充分、TMB底物变质、Streptavidin-HRP 加样量过高
解决方法：
洗板不充分，造成SA-HRP残留。检查洗板是否按要求进行；如使用洗板机，请充分冲洗管路并确保每个孔都被全部冲洗；TMB底物是否存在变蓝，使用新的底物试剂；避免使用金属物质接触底物造成变质失效；检查SA-HRP是否按要求的浓度配制；检查加样量是否按要求进行。
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