皖仪科技离子色谱法测定唾液中的葡萄糖浓度

引言

无创血糖检测一直备受青睐，人唾液具有生物信息丰富、采集安全方便等优点，是无创血糖检测的理想媒介。作为血糖标志物之一的唾液葡萄糖（唾液糖）因时效性更强，可反映血糖实时信息，受到广泛研究。经研究发现糖尿病患者的唾液糖均值明显高于糖代谢正常人群。当唾液糖浓度≥20 mg/L时，唾液糖与血糖水平呈显著正相关，且此时相关系数r最大。

T/SZJL 4-2023团体标准，实验离子色谱法测定人唾液中的葡萄糖含量。已于2023年10月10日正式实施。

皖仪开发了一种离子色谱测试方法检测人唾液中的葡萄糖含量，样品前处理操作简单，重现性好，准确性高，完全满足T/SZJL 4-2023团体标准在对人唾液中葡萄糖的测试要求。

关键词：离子色谱；食品；葡萄糖；方法学验证

1 实验方法

1.1测试条件

皖仪科技IC6300系列离子色谱仪

仪器：IC6300系列离子色谱仪配置安培检测器（Au工作电极）

自动进样器：AS2800/AS3110

色谱柱：糖类专用色谱柱（4.0mm×250mm）；

保护柱：糖类专用保护柱（30 mm×4 mm）；

柱温：30℃；

流速：0.45ml/min；

进样量：250μL；

检测模式：脉冲积分

1.2 使用试剂

淋洗液：A:超纯水 B：100mM NaOH  C:50mM NaOH+125mM CH3COONa

标样：葡萄糖：纯度≥99％或经国家认证授予标准物质证书的标准物质；

样品：人唾液

1.3样品制备

刺激性唾液收集：采集时将采集管中的棉棒放入口中咀嚼3~5min，待唾液浸润棉棒后，把棉棒放回唾液收集管，离子（4000r/min，10min）取上清液（唾液量≥1mL）。

唾液处理：将收集到的唾液样本立即置于95℃水溶液中30min后去除，自然冷却到室温，经台式离心机（4000r/min,10min）离心，取上清液，用孔径0.22μm的水系滤膜过滤。最后取适量滤液用水稀释后（唾液量和稀释倍数根据葡萄糖浓度具体调节），上机检测

1.4 标准溶液制备

混合标准溶液储备液：准确称取0.1g（精确至0.1mg）葡萄糖标准品，用超纯水溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液。置于0℃~4℃密封，保存期1个月。

标准工作液:分别移取标准储备液于100mL容量瓶中,用超纯水定容至刻度,配制成浓度为0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作标准液。现配现用。

1.5 标准曲线的制备

葡萄糖工作标准液:分别移取标准储备液于100mL容量瓶中,用超纯水定容至刻度,配制成浓度为0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的葡萄糖工作标准液。临用现配。

表1. 标准系列曲线浓度梯度表

2 测试结果

2.1 葡萄糖线性测试结果

依次移取0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L的系列标准工作曲线，按照1.1工作测试条件得到标准曲线谱图多点重叠图如图1，葡萄糖在该色谱条件下线性相关系数R=0.999以上，线性良好。

图1.食品中五种糖标准曲线重叠色谱图

表2. 线性方程

2.2 样品测试谱图

在1.1的工作测试条件下条件下，将人唾液样品进行检测。对样品进行精密度测试。样品重复性测试图谱如图2所示，样品图谱中的目标离子峰形对称，分离度良好，最终得到样品中葡萄糖含量6.7052mg/L。

图2. 样品重叠谱图

2.3 样品精密度测试结果

在1.1的工作测试条件下，再次收集人唾液样品进行检测。对样品进行精密度测试，测试图谱如图3所示，样品图谱中的目标离子峰形对称，分离度良好，最终得到复现样品中葡萄糖含量12.0558mg/L。

图3. 样品复现测试重叠谱图

2.4 检出限测试

在空白样品中加标准溶液2μg/L，对标准品进行检出限测定，测试结果如图4所示，其中葡萄糖信噪比为61.607，具体检出限和定量限如表三所示，低于方法（T/SZJL 4-2023团体标准）中样品的定量限的0.11μg/L要求；

图4. 检出限测试图谱

表3. 检出限与定量限测定表

2.5 样品加标回收重复性测试结果

分别向样品加2mg/L、4mg/L、6mg/L的标准品，每个浓度3个平行样品进行测定，其测定谱图分别如图5-7所示，其回收率在96.10％~99.50％。

图5加标2mg/L测试图谱

图6. 加标4mg/L测试图谱

图7加标6mg/L测试图谱

3 总结

本次采用皖仪科技离子色谱仪IC6300对人唾液中的葡萄糖测试进行系统适用性、标准曲线验证、重复性验证、加标回收率验证。测试结果峰形较好，线性良好，重复性高，灵敏度高，完全满足T/SZJL 4-2023团体标准对人唾液中的葡萄糖测试要求。