皖仪科技液相色谱对氯霉素的检测方法

前言

氯霉素是一种广谱抗生素，最初由委内瑞拉链霉菌产生。它在1947年被首次分离成功，并在次年开始通过化学方法合成。氯霉素对多种需氧革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌、厌氧的拟杆菌、立克次氏体、衣原体及菌质体都有抑制作用，尤其对沙门氏菌属、流感杆菌和拟杆菌属等有良好的抗菌能力。由于它的特性，在感染性疾病的治疗中发挥着重要的作用。然而，氯霉素的使用也伴随着一些副作用。氯霉素在人体内蓄积的药物浓度达到一定量时会产生多种急慢性中毒，并导致再生障碍性贫血症和溶血性贫血等疾病，导致身体不能制造红血球、白血球和血小板，同时还会引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性耳聋以及严重失眠。还可引发中毒性精神病，主要表现为幻视、幻听、定向力丧失、精神失常等。因氯霉素的毒副作用较大，联合国粮农组织、欧盟、美国均明确规定在食用动物中禁止使用氯霉素。2019年，在我国，氯霉素也被列入食品动物中禁止使用的药品。因此，对氯霉素的检测很有必要。

本篇介绍的分析方法，参考的是标准SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的测定，采用皖仪科技高效液相色谱仪配置紫外检测器测试。实验结果显示，系统适应性测试峰型良好，目标峰周围无杂峰。氯霉素线性良好，R值在0.999以上，保留时间重复性RSD为0.116%，峰面积重复性RSD为0.378%。氯霉素的检出限测试结果良好，浓度为0.05mg/L的氯霉素标准品，三倍信噪比作为检出限计算可知氯霉素仪器检出限为0.003mg/L。以上各项数据结果满足标准方法中对仪器的要求。

1 方法原理

高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。

2  仪器配置及实验方法

2.1 仪器配置

表1 皖仪液相配置清单表

2.2 实验方法

2.2.1 试剂和标准品制备

表2 试剂及标准品清单

2.2.1.1 标准储备液：称取10mg左右（精确到0.1mg）氯霉素标准品于10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，配成1000mg/L左右的标准储备液，-18℃冰箱保存。

2.2.1.2 标准使用液: 分别吸取氯霉素标准储备液适量，用甲醇稀释为100mg/L的氯霉素标准使用液。需现配现用。

2.2.1.3 标准工作曲线：将氯霉素标准使用液用0.5mol/L高氯酸溶液稀释浓度为0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L 系列浓度工作曲线。

2.2.2 色谱条件

表3 色谱条件

3 实验结果

3.1 系统适用性

图1 浓度为5mg/L氯霉素谱图

说明：由图可知，氯霉素峰型良好，目标峰周围无杂峰，满足实验要求。

3.2 线性关系

图2 氯霉素标曲

说明：本次测试的氯霉素标准工作曲线浓度为0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L。由上图可知，氯霉素线性方程为y=131.23850x+3.16337。R值为0.99978，线性良好，满足实验要求。

3.3  重复性

图3 浓度为0.5mg/L的氯霉素6针重复性谱图

表4 氯霉素6针重复性数据

说明：根据上表数据可知，氯霉素保留时间RSD为0.116%，峰面积RSD为0.378%。重复性均小于0.4%,满足实验要求。

3.4 检出限

图4 浓度为0.05mg/L的氯霉素标准品谱图

说明：根据上图数据所示，浓度为0.05mg/L的氯霉素标准品，三倍信噪比为检出限计算可知氯霉素仪器检出限为0.003mg/L。满足实验要求。

3.5 注意事项

1. 高氯酸具有强酸性和挥发性，配制溶液时注意在通风橱中进行。

2. 高氯酸遇光会分解，在配制标曲及实验时进样小瓶需使用棕色的。

4 总结

本篇介绍的分析方法，参考的是标准SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的测定，采用皖仪科技高效液相色谱仪配置紫外检测器测试。实验结果显示，系统适应性测试峰型良好，目标峰周围无杂峰。氯霉素线性良好，R值在0.999以上，保留时间重复性RSD为0.116%，峰面积重复性RSD为0.378%。氯霉素的检出限测试结果良好，浓度为0.05mg/L的氯霉素标准品，三倍信噪比作为检出限计算可知氯霉素仪器检出限为0.003mg/L。以上各项数据结果满足标准方法中对仪器的要求。