皖仪科技液相色谱对酱黄瓜中脱氢乙酸的检测

前言

脱氢乙酸凭借自身良好的抗菌性，常以防腐剂应用于奶油、面包、月饼、糕点等食品制作领域。一般来说，脱氢乙酸少量食用并不会对身体产生太大的危害。如果长期食用或食用过量时，可能引发中枢神经系统中毒。通常表现为体重或其他生长指标降低，食欲不振等症状，严重者会出现凝血功能异常、抑制骨骼发育等情况。在食品安全问题备受关注的今天，对食品中脱氢乙酸的准确检测更显得尤为重要。

本篇文章参考了《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定检测方法》GB 5009.121-2016 高效液相色谱法色谱条件，采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置紫外检测器进行检测。实验结果显示，脱氢乙酸的线性良好，R值在0.999以上，脱氢乙酸标准品色谱峰正常，理论塔板数在9000以上。脱氢乙酸标准品重复进样6次，保留时间RSD值为0.103%，峰面积RSD值为0.371%，重复性较好。以酱黄瓜作为测试样品，可得酱黄瓜样品中脱氢乙酸浓度为0.507μg/mL，检出限为0.0294μg/mL，定量限为0.0980μg/mL。酱黄瓜样品脱氢乙酸使用量为0.0025g/kg，检测结果正常，说明了该方法配备皖仪科技LC3200系列仪器满足酱黄瓜中脱氢乙酸的检测需求。

关键词：脱氢乙酸；高效液相色谱法；紫外检测器；酱菜。

1 实验方法

1.1  仪器配置

皖仪科技LC3200高效液相色谱仪

表1. 高效液相色谱系统配置清单

1.2 实验材料及辅助设备

甲醇：色谱纯；

乙酸铵：优级纯；

氢氧化钠；

硫酸锌；

脱氢乙酸标准品：CAS 520-45-6，纯度大于99.5%；

分析天平；

微孔滤膜：0.45μm；

pH计；

超声波清洗机；

涡旋混合器；

离心机：转速≥4000 r/min。

1.3测试条件

流动相：甲醇：0.02mol/L；乙酸铵=10：90；

色谱柱：C18色谱柱，4.6×250mm，5μm；

柱温：30℃；

流速：1.0 mL/min；

进样量：10μL；

检测波长：293nm。

1.4溶液配制

1.4.1乙酸铵溶液（0.02mol/L）

称取1.54g乙酸铵，溶于水并稀释至1L。

1.4.2氢氧化钠溶液（20g/L）

准确称取20g 氢氧化钠，溶于水并稀释至1L。

1.4.3硫酸锌溶液（120g/L）

称取120g硫酸锌，溶于水并稀释至1L。

1.4.4脱氢乙酸标准贮备液（1.0mg/mL）

准确称取脱氢乙酸标准品0.1000g（精确至0.0001g）于100mL容量瓶中，用10mL氢氧化钠溶液（20g/L）溶解，用水定容。4℃保存，有效期为3个月。

1.4.5脱氢乙酸标准工作液（50μg/mL）

准确吸取脱氢乙酸贮备液5.0mL于100mL容量瓶中，用水定容。4℃保存，有效期为1个月。

1.4.6脱氢乙酸标曲实验工作液

分别吸取脱氢乙酸标准工作液（50μg/mL）0.5mL、1.0mL、2.0mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用水定容。配制成浓度为0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL标曲实验工作液。4℃保存，有效期为1个月。

2 结果与讨论

2.1 系统适用性

图1. 空白色谱图

图2. 脱氢乙酸标准品色谱图

表2. 脱氢乙酸标准品色谱参数

说明：由上述谱图可见，脱氢乙酸标准品色谱峰正常，保留时间为9.852 min，理论塔板数为9000以上。

2.2 标准曲线

图3. 脱氢乙酸标准曲线及相关系数

说明：本次测试的脱氢乙酸标准工作曲线浓度为0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10μg/mL。脱氢乙酸标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.999，满足实验分析需求。

2.3 重复性

图4. 脱氢乙酸标准品重复性实验色谱图

表3. 脱氢乙酸标准品色谱参数

说明：脱氢乙酸标准品重复进样6次，保留时间RSD值为0.103%，峰面积RSD值为0.371%，重复性较好。

2.4 样品测试

选择酱黄瓜作为基质，称取样品4.9968g，置于25mL离心管中，加入约10mL水、5mL硫酸锌溶液（120g/L），用氢氧化钠溶液（20g/L）调pH至7.5，转移至25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于25mL离心管中，超声提取10min，4000r/min离心10min。取上清液经过0.45μm有机滤膜，进样量10μL，供高效液相色谱仪测定。

图5. 酱黄瓜样品溶液色谱图

表4. 酱黄瓜样品溶液色谱参数

表5. 酱黄瓜样品脱氢乙酸使用量

*指标要求源于《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》GB2760-2014

说明：通过计算得酱黄瓜中脱氢乙酸浓度为0.507μg/mL，检出限为0.0294μg/mL，定量限为0.0980μg/mL，满足《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定检测方法》GB 5009.121-2016高效液相色谱法方法要求。酱黄瓜样品脱氢乙酸使用量为0.0025g/kg，满足《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》GB2760-2014脱氢乙酸最大使用量要求，检测结果正常。

2.5 注意事项

1. 本实验方法中水相流动相含量较高，使用常规C18色谱柱实验时可能会出现脱氢乙酸峰形较差等问题，亲水型的C18色谱柱会表现更好；

2. 脱氢乙酸标准贮备液及相关工作液均需在4℃条件下保存，实验前要注意溶液的有效期。

3   结论

本次采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置紫外检测器，依据《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定检测方法》GB 5009.121-2016 高效液相色谱法进行检测。实验结果显示，脱氢乙酸的线性良好，R值在0.999以上，脱氢乙酸标准品色谱峰正常，理论塔板数在9000以上。脱氢乙酸标准品重复进样6次，保留时间RSD值为0.103%，峰面积RSD值为0.371%，重复性较好。以酱黄瓜作为测试样品，可得酱黄瓜样品中脱氢乙酸浓度为0.507μg/mL，检出限为0.0294μg/mL，定量限为0.0980μg/mL。酱黄瓜样品脱氢乙酸使用量为0.0025g/kg，检测结果正常。说明了该方法配备皖仪科技LC3200系列仪器满足酱黄瓜中脱氢乙酸的检测需求。