中华人民共和国国家标准

GB 5009.26-2023

食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定

前言

  本标准代替GB5009.26-2016《食品安全国家标准食品中N-亚硝胺类化合物的测定》。

  本标准与GB 5009.26-2016相比，主要变化如下：

  ——增加了第一法水蒸气蒸馏-气相色谱质谱/质谱法；

  ——增加了第二法QuEChERS气相色谱-质谱/质谱法；

  ——增加了第三法水蒸气蒸馏-液相色谱-质谱/质谱法；

  ——删除了气相色谱-质谱法；

  ——修改了原第二法气相色谱-热能分析仪法为第四法；

  ——修改了前处理蒸馏法条件、气相色谱热能分析仪法的检出限和定量限。

1范围

  本标准规定了食品中N-二甲基亚硝胺（NDMA）的测定方法。

  本标准适用于肉及肉制品、水产动物及其制品中N-二甲基亚硝胺的测定。

第二法QuEChERS-气相色谱质谱/质谱法

9原理

  本法以N-二甲基亚硝胺-D6为内标，试样中加入内标，试样中的N-二甲基亚硝胺经乙腈提取，基质分散萃取填料净化，采用气相色谱-质谱/质谱仪测定，内标法定量。

10试剂与材料

  除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水 。

10.1 试剂

10.1.1乙腈（C2H3N）：色谱纯。

10.1.2硫酸镁（MgSO4）。

10.1.3氯化钠（NaCl）：优级纯。

10.1.4 PLS-A粉末：吡咯烷酮修饰聚苯乙烯二乙烯苯聚合物粉末或EMR-Lipid萃取粉剂：增强型去脂分散粉末。

10.1.5 微孔滤膜（0.22μm），有机相型。

10.2标准品

  同3.3。

10.3标准溶液配制

10.3.1 N-二甲基亚硝胺标准储备液（100μg/mL）：准确吸取1.0mLN-二甲基亚硝胺标准溶液，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内。-18℃避光保存，保存期6个月。

10.3.2 N-二甲基亚硝胺标准中间液（1μg/mL）：准确吸取1.0 mL N-二甲基亚硝胺标准储备溶液（100 μg/mL），置于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内。-18℃避光保存，保存期3个月。

10.3.3 N-二甲基亚硝胺-D6内标储备液（100μg/mL）：准确吸取N-二甲基亚硝胺-D6标准溶液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内。-18℃避光保存，保存期6个月。

10.3.4 N-二甲基 亚硝胺-D6内标中间液（1μg/mL）：准确吸取N-二甲基亚硝胺-D6内标储备液1.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内。-18℃避光保存，保存期3个月。

10.3.5 N-二甲基亚硝胺标准及内标混合系列工作液：分别准确吸取N-二甲基亚硝胺标准中间液（1 μg/mL）0.005 mL、0.01 mL、0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL和0.2 mL，置于10 mL容量瓶中，各加入内标中间液（1 μg/mL）0.05 mL用乙腈定容至刻度，混匀。N-二甲基亚硝胺标准系列工作溶液质量浓度为0.5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L和20 μg/L，其中内标的质量浓度均为5 μg/L。临用现配。

11仪器和设备

11.1 气相色谱-质谱/质谱仪（GC-MS/MS），配备大体积程序升温进样口。

11.2 电子天平：感量为0.001 g。

11.3 振荡器。

11.4 冷冻离心机。

11.5 离心管：50 mL、15 mL。

11.6 陶瓷均质子。

12分析步骤

12.1样品前处理

12.1.1 试样制备

  同5.1.1。

12.1.2 提取

  干制品称取5 g（精确到0.01 g）于50 mL离心管，加入5 mL水，振荡混匀[鲜样品称取10 g（精确到0.01 g）置于50 mL离心管中]，加入N-二甲基亚硝胺内标中间液（1 μg/ mL）50 μL，向其准确加入10 mL乙腈，涡旋振荡2 min，置于-20℃冰箱冷冻20 min，加入陶瓷均质子1粒以及4g硫酸镁和1 g氯化钠，涡旋振荡2 min，置于冷冻离心机中，转速9 000 r/min，10℃离心5 min，上清液待净化。

12.1.3 净化

  称取150mgPLSA粉末（或1g增强型脂质去除EMR-Lipid萃取粉剂或同级品）于15mL离心管中，加入5 mL水涡旋振荡，立即加入5 mL 12.1.2 中的上清液涡旋振荡1 min， 置于冷冻离心机，9000 r/min，10℃离心5 min。

12.1.4除水

  称取1.6g硫酸镁和0.4 g氯化钠于另一15 mL离心管，加入12.1.3的净化液涡旋振荡2 min，置于冷冻离心机中，转速9000 r/min，10℃离心5 min。 取上层有机相经0.22 μm微孔滤膜过滤后，上机测定。

  注：试验需在通风橱中进行，并佩戴专业的防护工具（如口罩、手套等）。

12.2 仪器参考条件

12.2.1气相色谱 条件

a）色谱柱：强极性石英毛细管柱[30 m×0.25 mm（内径）×0.25 μm（膜厚）]，或相当者。

b）进样口温度：初始温度50℃保留0.16 min，900℃/min升至220℃保持5 min。

c）进样口溶剂放空模式：放空时间0.16min，放空流量50mL/min。

d）载气：氦气，纯度≥9.999%，流速1 mL./ min。

e）进样方式：不分流进样。

f）进样量：5 μL。

g）升温程序：初始温度 40℃，以10℃/min升至80℃，以1℃/min升至100℃，再以20℃/min升至240℃，保持2 min。

12.2.2质谱/质谱条件

a）离子源温度：250℃。

b）色谱与质谱接口温度：250℃。

c）电离方式：电子轰击源（EI源）。

d）电离能量：70 eV。

e）溶剂延迟：6 min。

f）四级杆温度：150℃。

g）监测模式：多反应监测（MRM）模式，离子对参数见表3。

12.3 标准曲线的制作

  同5.3。

12.4试样溶液的测定

  同5.4。

12.5空白试验

  用乙腈代替试样，按12.1及12.2所述操作步骤进行，空白测定值需低于该方法的定量限的50%。

13分析结果的表述

  试样中N-二甲基亚硝胺含量按式（2）计算。

式中：

X——试样中N-二甲基亚硝胺的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

ρ——试样中N-二甲基亚硝胺色谱峰与对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应N-二甲基亚硝胺质量浓度，单位为微克每升（μg/L）；

ρ0——空白试验溶液中N-二甲基亚硝胺色谱峰与对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应N-二甲基亚硝胺质量浓度，单位为微克每升（μg/L）；

V——试液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

1 000——换算系数；

m——试样的质量，单位为克（g）。

计算结果保留小数点后2位数字。

14精密度

  在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

15其他

15.1 方法检测限

  称样量为5 g，定容体积为10 mL时，检出限为0.30 μg/kg，定量限为1.00μg/kg。

  称样量为10 g，定容体积为10 mL时，检出限为0.15 μg/kg，定量限为0.50μg/kg。

15.2 安全警示

  本试验所涉及的对人体可能造成危害的试剂包括有机溶剂（如乙腈、正己烷）等。试验人员有可能因接触这些物质而带来风险，因而，涉及这些物质的试验操作中应在通风橱内进行，并佩戴专业的防护工具（如手套、口罩等）。

  亚硝胺类化合物是强致癌物，试验结束后，随意丢弃这些物质可能会对人员及环境造成损害，同时，在处理不当时，试验用的N-二甲基亚硝胺标准品及过期标准物质也可能带来风险，因而，在试验过程中不得随意丢弃这些物质，应分别回收在密闭容器并保存在远离火源、通风良好的环境中。