皖仪科技离子色谱助力医疗健康检测

引言：胱氨酸(Cystine）是人体必需的氨基酸，能协助皮肤的形成，且对解毒作用很重要，借由减低身体吸收铜的能力，胱氨酸保护细胞免于铜中毒。当它被代谢时，会释放硫酸，而硫酸会与其他物质产生化学作用，增加整个代谢系统的解毒功能。此外，它辅助胰岛素的供给，胰岛素是人体利用糖和淀粉所必需的。也能促进细胞氧化还原，使肝功能旺盛，促进白细胞增生，阻止病原菌发育。但过量服用会有副作用，主要临床表现为尿路结石。

胱氨酸尿（cystinuria）指尿中有大量胱氨酸，是一种比较常见的遗传性疾病，由肾小管胱氨酸转运缺陷引起。任何年龄均可发生，儿童多见。本病多易形成尿路结石，结石一般在膀胱中形成，临床常表现为肾绞痛、血尿、发热、尿频、尿急和尿痛、肾功能不全等。本病尚无根治方法，多采取对症治疗，主要防治结石形成及其并发症。

尿中过量胱氨酸可通过硝普盐氰化物试验检出。色谱法和电泳可进一步明确诊断结果，提供准确数据。色谱法常见测试胱氨酸的方法有液相色谱-质谱法等，本次采用的是离子色谱测试尿液中的胱氨酸。

1 实验方法

1.1 测试条件

仪器：IC6600系列离子色谱仪配置柱后衍生模块

色谱柱：阳离子分析柱

柱温：30℃；

流速：分析泵流速：0.3mL/min；

柱后碱液流速：0.3mL/min

进样量：25μL；

检测器：安培检测器

检测模式：脉冲积分-金电极，AAA，氨基酸

1.2 实验试剂

淋洗液：甲烷磺酸溶液梯度淋洗；

柱后碱液：300mM氢氧化钠溶液：精密移取15.7mL50%氢氧化钠溶液，加入装有超纯水的1000mL塑料容量瓶中，加超纯水定容至刻度，过滤，超声，加氮气保护；

标样：L-胱氨酸；

样品：尿液；

标准储备溶液：精密称取胱氨酸0.1000g至100mLPMP材质塑料容量瓶中，加1mL盐酸使其溶解，再加水定容至刻度，混匀即得。（浓度为1000mg/L）

1.3 标准曲线的制备

分别精密移取0.025mL、0.05mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL标准储备溶液，置于6个100mL容量瓶中，加超纯水定容至标线，混匀，即得。标准曲线浓度梯度表见表1；

表1 标准曲线浓度梯度表

1.4 样品溶液配制

正常尿液前处理：精密移取正常尿液1mL至100mL容量瓶中,加1mL盐酸使其溶解，再加水定容至刻度，摇匀即得。样品过RP柱以及滤膜后进样分析。

模拟高胱氨酸病人尿液前处理：模拟浓度分别为300mg/L、600mg/L、900mg/L，并在4℃冷藏冰箱中过夜保存后进行测试。精密移取模拟尿液1mL至100mL容量瓶中，加1mL盐酸使其溶解，再加水定容至刻度，摇匀即得。样品过RP柱以及滤膜后进样分析。

2 测试结果

2.1 空白测试

在测试前确保仪器稳定以及系统已经冲洗干净，需要进行空白实验，按照“1.1“项测试条件进行测试，得到梯度空白测试图谱和纯水测试图谱，由图可见，空白测试图谱与纯水测试图谱中均没有出现干扰。梯度空白测试图谱见图1，纯水测试图谱见图2。

图1 梯度空白测试图谱

图2 纯水测试图谱

2.2 标曲测试

标准曲线系列浓度见表1，按照1.1的测试条件进行测试，得到标准曲线谱图多点重叠谱图如图3，待测离子在该色谱条件下标准曲线线性均大于0.999，线性良好，线性方程如下表2。

图3 标准曲线谱图多点重叠色谱图

表2 线性方程

2.3 精密度测试

按照“1.1”项色谱条件，分别连续注入数针0.5mg/L、5mg/L、20mg/L胱氨酸标准溶液进样分析，测得样品图谱见图4、图5、图6。精密度测试数据见表3。

图4 0.5mg/L标准溶液连续6针重复性图谱

图5 5mg/L标准溶液连续6针重复性图谱

图6 20mg/L标准溶液连续6针重复性图谱

表3 样品连续3针测试数据

2.4 样品测试

按照“1.1”项色谱条件，连续注入数针样品溶液和模拟样品溶液（模拟600mg/L尿液样品）进样分析，样品未检出胱氨酸，样品重复性谱图见图7。模拟600mg/L尿液样品样品重复性谱图见图8。模拟600mg/L尿液样品样品重复性结果及回收率见表4。

图7 样品连续6针测试重叠色谱图

图8 模拟600mg/L尿液样品连续6针重复性图谱

表4 模拟600mg/L尿液样品样品重复性结果及回收率

3 结论

本次实验采用离子色谱脉冲安培-柱后衍生法测试尿液中的胱氨酸，测试方法简单，稳定且不受干扰，运行时间短且重复性好，回收率满足测试要求。