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ENZO热销产品——FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit组蛋白去乙酰化酶荧光活性检测试剂盒
目前，组蛋白去乙酰化酶抑制剂已经显示出其作为抗肿瘤药物的前景，这也自然激发了研究者们对于筛选HDAC（Histone deacetylase，组蛋白去乙酰化酶）抑制化合物的兴趣。Enzo的FLUOR DE LYS®HDAC荧光活性检测试剂盒（货号：BML-AK500-0001）是一种灵敏、便捷的组蛋白去乙酰化酶检测试剂盒，可替代使用传统的放射性标记的乙酰化组蛋白和肽/HPLC法检测组蛋白去乙酰化酶的方案。
FLUOR DE LYS®去乙酰化酶检测平台是Enzo的升级酶活性检测系列产品的基础，其中的产品就包括用于筛选HDAC（组蛋白去乙酰化酶）活性调节剂和Sirtuin（长寿蛋白，一种去乙酰化酶）活性调节剂的试剂盒。Enzo还可提供基于荧光共振能量转移（FRET）的试剂盒，用以检测基质金属蛋白酶（MMPs）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）的活性，以及提供基于磷酸特异性抗体的激酶检测试剂盒。
这些检测证明了Enzo在组装小肽、合成活性重组蛋白、荧光标记和检测技术，以及抗体开发等多方面协同的能力，也保障了Enzo能够生产出功能强大且重复性好的检测试剂盒。
Enzo的酶活性检测试剂盒均具有以下特点：
高品质：高活性、高纯度的重组酶，可呈现高质量的底物结合效果
灵活性：批量酶和底物可用于筛选后研究
强创新：多种readout 格式的专-利底物/显影剂化学物质
作用机制：
FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit基于Enzo特-有的 FLUOR DE LYS®（荧光法组蛋白去乙酰化酶-赖氨酸）底物和显影剂组合，只需2步简单的混合步骤，即可在同一个96 孔板上进行检测。首先，将含有乙酰化赖氨酸侧链的FLUOR DE LYS®底物与含有HDAC活性的样品（HeLa核或其他提取物、纯化酶、珠结合免疫复合物等）一起孵育。底物的去乙酰化会使底物增敏，所以在第二步中，将其与FLUOR DE LYS®显影剂混合后会产生荧光团。
该检测方法目前已经成功用于所有已知的I类HDAC——HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8（见产品数据表）和II 类HDAC 4-7、9和10，以及人类Sir2同源物和SIRT1（见产品数据表）的制备。Enzo Life Sciences的研究表明，FLUOR DE LYS®底物具有细胞渗透性，并可在原位被细胞HDAC去乙酰化。脱乙酰化的底物在细胞内积聚后，可通过向细胞裂解液中加入FLUOR DE LYS®显影剂进行定量测定。
Figure 1. HDAC荧光活性检测的反应方案。底物去乙酰化使其对显影剂敏感，从而产生荧光团（symbol）。荧光团可被360 nm的光激发，并发射出460 nm的光，发射光在荧光平板阅读器上可被检测到。
产品特点：
使用提供的核提取物，有助于检测裂解物、免疫沉淀物以及筛选抑制剂；
含有HeLa核提取物，作为HDAC 1和2的丰富来源，可用作阳性对照，也可用作筛选HDAC活性的来源；
与I & IIb类HDAC和Sirtuin兼容（添加NAD+）；
无放射性，没有提取步骤；
所提供的试剂足够分析100-200次。
产品信息：
| 产品货号 | BML-AK500-0001 |
| 产品名称 | FLUOR DE LYS® HDAC fluorometric activity assay kit |
| 规格 | 1*96wells |
| 使用/稳定性 | Store all components, except the microtiter plate, at -80℃ for the highest stability. The HeLa Nuclear Extract, BML-KI140, must be handled with particular care in order to retain maximum enzymatic activity. Defrost it quickly in a RT water bath or by rubbing between fingers, then immediately store on an ice bath. The remaining unused extract should be refrozen quickly, by placing at -80°C. If possible, snap freeze in liquid nitrogen or a dry ice/ethanol bath. To minimize the number of freeze/thaw cycles, aliquot the extract into separate tubes and store at -80℃. The FLUOR DE LYS® Substrate, BML-KI104, when diluted in Assay Buffer, may precipitate after freezing and thawing. It is best, therefore, to dilute only the amount needed to perform the assays of that day. |
| 运输 | Dry Ice |
| 长期保存 | -80℃ |
| 试剂盒组分 | Nuclear Extract from HeLa Cells (human cervical cancer cell line) (Prod. No. BML-KI140-0100) (100 µl; In 0.1M KCl, 20mM HEPES/NaOH, pH 7.9, 20% (v/v) glycerol, 0.2mM EDTA, 0.5mM DTT, 0.5Mm PMSF, prepared according to a modification of J.D. Dignam et al. (1983) and S.M. Abmayr et al. (1988)). Storage: -80℃, avoid freeze/thaw cycles FLUOR DE LYS® Substrate (Prod. No. BML-KI104-0050) (50 µl; 50mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Developer Concentrate (20×) (Prod. No. BML-KI105-0300) (300 µl; 20×stock solution, dilute in assay buffer before use) Storage: -80℃ Trichostatin A (HDAC Inhibitor) (Prod. No. BML-GR309-9090) (100 µl; 0.2mM in DMSO) Storage: -80℃ FLUOR DE LYS® Deacetylated Standard (Prod. No. BML-KI142-0030) (30 µl; 10mM in DMSO) Storage: -80℃ HDAC Assay Buffer (Prod. No. BML-KI143-0020) (20 ml; 50mM TRIS/Cl, pH 8.0, 137mM NaCl, 2.7mM KCl, 1mM MgCl2) Storage: -20℃ 1/2 volume microplate (Prod. No. BML-KI101) Storage: Ambient 1/2 volume white microplate (Prod. No. BML-K571) Storage: Ambient |
产品引用文献：
The activation of histone deacetylases 4 prevented endothelial dysfunction: A crucial mechanism of HuangqiGuizhiWuwu Decoction in improving microcirculation dysfunction in diabetes: M. Chen, et al.; J. Ethnopharmacol. 307, 116240 (2023), Abstract;
Four New Anthraquinones with Histone Deacetylase Inhibitory Activity from Ventilago denticulata Roots: N. Hangsamai, et al.; Molecules 27, 1088 (2022), Abstract;
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