皖仪科技·草甘膦高效液相色谱仪-柱后衍生专机系统

本篇文章参考了《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.9-2023草甘膦高效液相色谱-柱后衍生法的方法条件，采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置荧光检测器、柱后衍生系统进行检测。

实验结果表明，草甘膦标准品线性良好，R值在0.999以上，草甘膦标准品色谱峰分离正常，理论塔板数在7000以上。草甘膦标准品重复进样6次，定性RSD值为0.188%，定量RSD值为0.382%，重复性较好。使用配备皖仪科技LC3200系列仪器检测草甘膦标准品的检测限为1.4μg/L。自来水中草甘膦加标浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/L重复测定6次进行分析，计算得草甘膦相对标准偏差分别为0.256%、0.590%、0.518%，加标回收率分别为99.8%-100.4%，98.9%-100.5%，97.5%-98.5%，符合《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.9-2023草甘膦高效液相色谱-柱后衍生法的方法要求。说明该方法配备皖仪科技LC3200系列仪器完全满足草甘膦的检测需求。

1 方法原理

草甘膦经阴离子交换色谱柱中实现分离后，在衍生池与衍生剂反应，先用次氯酸盐溶液将草甘膦氧化成氨基乙酸；然后氨基乙酸与邻苯二醛（OPA）和2-巯基乙醇（MERC）的混合液反应，形成一种强光的异吲哚产物，使用灵敏度更高的荧光检测器进行检测。

2 实验方法

2.1 仪器配置

       皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列

2.2 测试条件

液相色谱条件

流动相：5L纯水加入26mL磷酸、2.7mL硫酸；色谱柱：阴离子交换柱，5μm, 4.6×250mm；柱温：50℃；流速：0.5mL/min；进样量：200μL；

柱后衍生系统

衍生溶液1：次氯酸盐氧化剂；衍生溶液1流速：0.5mL/min；衍生反应池1温度：50℃；衍生溶液2：OPA（邻苯二醛）-MERC（2-巯基乙醇）溶液；衍生溶液2流速：0.4mL/min；衍生反应池1温度：38℃；激光波长：340nm；发射波长：445nm。

2.3 实验材料及辅助设备

磷酸：优级纯；

硫酸：优级纯；

甲醇：色谱纯；

磷酸二氢钾：优级纯；

氯化钠：优级纯；

氢氧化钠：分析纯；

次氯酸钙：有效氯70.9%；

邻苯二醛（OPA）：用于HPLC荧光标记;

2-巯基乙醇（MERC）；

硼酸：分析纯；

氢氧化钾：分析纯；

标准物质：草甘膦，纯度≥99.5%；

微孔滤膜（0.22μm）；

磁力搅拌器；超声波清洗机。

2.4 溶液配制

n  2.4.1 氧化剂

称取0.5g次氯酸钙溶解于500mL纯水中，用磁力搅拌器快速搅拌45min。取10mL次氯酸钙储备溶液于1L的容量瓶中，加入1.74g磷酸二氢钾、11.6g氯化钠、0.4g氢氧化钠，加水稀释，定容，混匀。经0.22μm的滤膜过滤。

n  2.4.2 OPA-MERC溶液

将100g硼酸和72g氢氧化钾溶于700mL纯水中并转移至1L的容量瓶中，需1h～2h；加入含0.8g OPA的5mL甲醇溶液，2.0mL MERC，混匀。

n  2.4.3 草甘膦标准储备溶液（100μg/mL）

用纯水配制草甘膦质量浓度为100μg/mL的标准储备溶液。储存于聚丙烯瓶中，0℃～4℃冷藏保存。每月重新配制。

n  2.4.4 草甘膦标准使用溶液

用纯水对100μg/mL的草甘膦标准储备溶液进行稀释，配制质量浓度分别为10μg/mL和1.0μg/mL的标准使用溶液。储存于聚丙烯瓶中，0℃～4℃冷藏保存，现配现用。

n  2.4.5 标准系列工作溶液

用纯水对草甘膦标准使用溶液进行稀释，配制质量浓度为0μg/mL、0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL标准系列溶液，储存于聚丙烯瓶中。使用前取200μl注入色谱仪。

3 结果与讨论

3.1 标准曲线

      图1 草甘膦标准曲线及相关系数

说明：草甘膦标准曲线线性范围较好，线性相关系数＞0.999，满足实验分析需求。

3.2 标准品

         图2 草甘膦标准品色谱图

说明：由上述谱图可见，草甘腾标准品色谱峰正常，理论塔板数在 7000 以上。

3.3 重复性

     图3 草甘膦标准品重复性实验色谱图

说明：草甘膦标准品重复进样6次，保留时间RSD值为0.188%，峰面积RSD值为0.382%，重复性较好。

3.4 检出限

          图4 单进纯水色谱图

        图5 草甘膦标准品色谱图

说明：实验结果表明使用配备皖仪科技LC3200系列仪器检测草甘膦标准品的检测限为1.4μg/L。

3.5 加标回收验证

对自来水进行低、中、高浓度加标重复测定，草甘膦加标浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/L，分别重复测定6次进行分析。

    图6 自来水加标50μg/L草甘膦标准溶液色谱图

说明：自来水中草甘膦加标浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/L重复测定6次进行分析，计算得草甘膦相对标准偏差分别为0.256%、0.590%、0.518%，加标回收率分别为99.8%-100.4%，98.9%-100.5%，97.5%-98.5%，满足《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.9-2023草甘膦 高效液相色谱-柱后衍生法的方法要求。

3.6 样品测试

取自来水进行测试，加入100mg/L的硫代硫酸钠消除氯带来的影响，经0.22μm的滤膜过滤。进样量取200μL上样分析，检测谱图如下：

         图7 自来水样品色谱图

说明：从检测结果可知，自来水样品中未检出草甘膦，结果正常。

4 结论

本文依据《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.9-2023草甘膦 高效液相色谱仪-柱后衍生法，采用皖仪科技高效液相色谱仪LC3200系列配置荧光检测器、柱后衍生系统。实验结果显示，草甘膦的线性良好，R值在0.999以上，草甘膦标准品色谱峰分离正常，理论塔板数在7000以上。草甘膦标准品重复进样6次，定性RSD值为0.188%，定量RSD值为0.382%，重复性好，使用皖仪科技LC3200系列仪器检测草甘膦标准品的检测限为1.4μg/L。自来水中草甘膦加标浓度分别为100μg/L、50μg/L、25μg/L重复测定6次进行分析，计算得草甘膦相对标准偏差分别为0.256%、0.590%、0.518%，加标回收率分别为99.8%-100.4%，98.9%-100.5%，97.5%-98.5%。符合《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.9-2023草甘膦 高效液相色谱-柱后衍生法的方法要求。说明了该方法配备皖仪科技LC3200系列仪器检测草甘膦的可行性，完全满足草甘膦的检测需求。