dsGreen 是一种非常灵敏的染料,用于检测双链 DNA (dsDNA)。两种染料均用于实时 qPCR 实验中扩增的非特异性检测。
如果 dsGreen 试剂储存温度低于 20 °С,请将其解冻并保存在室温下。为了快速解冻,可将试剂加热至 50 °С。
根据 PCR 试剂制造商的说明计算反应所需试剂的体积。请注意,dsGreen(库存 100х)必须在 PCR 主混合物中稀释至最高 1 倍浓度。
根据 PCR 试剂制造商的说明制备不含 DNA 的 1x 主混合物,添加必要量的 dsGreen。如果您使用不带热启动的 Taq 聚合酶,请将预混液和 PCR 管放在冰上。
将主混合物转移至管或板中并添加 DNA。
根据您的仪器制造商的说明继续进行放大。
笔记:
qPCR 实验中始终包含阳性和阴性对照。 qPCR 扩增的温度程序与给定模板和引物的标准 PCR 程序没有区别。对于检测,应使用 FAM 通道。为了能够区分特定产物和引物二聚体,请在 PCR 程序中使用熔解曲线步骤。
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