dsGreen 是一种特异性结合双链 DNA 的荧光染料。染色方案有三种变体:凝胶浸泡、凝胶预染色和样品预染色。
凝胶浸泡
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶的经典方法。
在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中运行样品。
在烧杯中,将 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE、TBE 或 TAE 缓冲液(对于小型凝胶),或将 50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE、TBE 或 TAE 缓冲液(用于中型凝胶)。用抹刀、棒或磁力搅拌器充分混合。
将稀释的 dsGreen 溶液倒入适当的托盘或平底锅中,并浸没凝胶。
将凝胶浸泡 5-10 分钟。
使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯(365 nm),但这种光源的激发效率稍低。
凝胶预染色
该方法仅适用于琼脂糖凝胶,不适用于 PAAG。注意——这种染色方法有时会导致条带变形或形成污点。在这种情况下使用凝胶浸泡。
使用微波炉或加热装置将缓冲液中的琼脂糖煮沸至溶解。
在仍为液体时,每 10 mL 凝胶溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液。充分混合。
倒入凝胶并使其凝固。
为了获得最佳结果,在阳极附近每 10 mL 缓冲液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液(“+”,红线)。
运行示例。可以在 254 nm 低压汞灯下实时监测迁移带。
使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯(365 nm),但这种光源的激发效率稍低。
样品预染色
不敏感、且经济的方法。
在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液。
将 1 µL 溶液添加到每个要在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上分离的样品中。
运行示例。可以在 254 nm 低压汞灯下实时监测迁移带。
使用可用光源和绿色/黄色滤光片查看或记录凝胶。蓝光透射仪或紫外低压汞灯 (254 nm) 可用于可视化 dsGreen 染色的凝胶。也可以使用高压汞灯(365 nm),但这种光源的激发效率稍低。
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