β-木糖苷酶活性检测试剂盒（微量法）

产品货号：BA1028

产品规格：100管/48样

产品内容：

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入1mL蒸馏水。

2. 标准品：5μmol/mL对硝基苯酚溶液。

产品说明：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰， 测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 植物样本：称取约0.1g样品，加1.0 mL提取液充分冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃，离心20min，弃沉淀，取20μL上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。

2. 细菌、真菌样本：收集约500万个细胞，加入1.0 mL提取液，超声波破碎（冰浴，功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，弃沉淀 ，取20μL上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。

二、测定操作表 

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，对照管调零。

2. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL。

3. 样本测定： 

三、β-木糖苷酶活性计算 

根据标准管的吸光度ΔA标准（x）和浓度（y，μmol/mL）建立标准曲线，将ΔA测定带入标准曲线中，计算样本生成的产物量y（μmol/mL）。

1. 按样本蛋白含量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4时，每毫克蛋白质1min内催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（U/ mg prot）=(y×V样)÷(V样×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr

2. 按样本质量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4时，每克样本1min内催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（U/g 质量）＝(y×V样)÷(W×V样÷V样总)÷T=0.05×y÷W

3. 按细胞数量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4时，每10⁴个细胞1min内催化产生1μmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（U /10⁴cell）= (y×V样)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0001×y

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；0.2mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，20min。

注意事项：

1. 吸光度变化应该控制在0.05-0.6之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。