层粘连蛋白胚胎干细胞培养基的培养条件介绍

来源：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司 2024年03月04日 11:00

层粘连蛋白（Laminin）胚胎干细胞培养基是一种常用的培养基，用于促进和维持胚胎干细胞的生长和自我更新。以下是一般的操作流程：

准备工作：

确保操作区域干净整洁，并做好手部卫生。

准备好所需器材，包括培养皿、离心管、移液器等。

制备培养基：

根据实验室制定的配方，将各种组分按比例混合制备完整的Laminin胚胎干细胞培养基。通常包括DMEM/F12或者Essential8介质等。

细胞预处理：

从合适来源（如小鼠或人类）获取所需的新鲜或冷冻保存的低通行证级别（P0-P4）ES细胞。

在含有FeederLayer或无FeederLayer条件下进行扩增。

若使用无FeederLayer条件，则需要预先在耐热涂层料中涂覆Laminin以提供粘附支持。

细胞孵育：

小心地将已经预处理过并悬浮在适当培养基中的ES细胞种植在含有Laminin的预涂层皿中。

尽量避免过度密集，以保证单个细胞形成分离生长。

培养条件的维护：

在恒温孵育箱中将培养皿放置在37°C和5%CO2/空气混合气体环境下进行培养。

定期更换培养基，以去除代谢产物并提供新的营养物质。

细胞密度过高时，可进行适当的稀释以保持细胞生长和功能。

细胞检查和分析：

使用显微镜观察细胞形态、增殖情况及表型变化。

可通过流式细胞术、实时定量PCR等方法对ES细胞进行表型和功能分析。

请注意，具体操作步骤可能会根据实验室内特定要求、来源及目标应用而有所不同。因此，请根据实际情况调整操作步骤，并参考相关文献或咨询专业人员以获取最佳结果。

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